Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоидов (ИЦИС). Методика

Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоидов (ИЦИС) заключается во введении одного сперматозоида непосредственно в цитоплазму ооцита. Данный метод был впервые успешно применен к ооциту человека в 1994 г. и с тех пор коренным образом изменил лечение бесплодия с выраженным мужским фактором.

Инъекция сперматозоида в цитоплазму яйцеклетки позволяет опустить многие шаги при обработке спермы и предварительные приготовления, не снижая показателей оплодотворений. В настоящее время идут споры о том, когда следует проводить интрацитоплазиматическую инъекцию сперматозоидов (ИЦИС).

Некоторые программы используют этот метод довольно свободно, в то время как другие остаются более консервативными. Следующие показания для проведения интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов (ИЦИС) подтверждены опытным путем.
• Пара уже обращалась к традиционной инсеминации, однако безрезультатно.
• Общая концентрация подвижных сперматозоидов менее 10 млн/мл.
• Морфологически среди сперматозоидов присутствует менее 4% нормальных форм по точному критерию (может зависеть от других параметров спермы, таких как концентрация, подвижность и объем).

инъекция сперматозоидов

Техника интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов (ИЦИС)

Оборудование для интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов (ИЦИС), как и для любой другой процедуры микроманипуляции, состоит из инвертированного фазово-контрастного микроскопа с микроманипуляторами и инъекторами, позволяющими осуществлять манипуляции и клеточную хирургию. Стадия нагревания при использовании микроскопа рекомендована для поддержания постоянной температуры, хотя некоторые группы показывают весьма приемлемый результат без применения стадии нагревания при микроманипуляции.
Гидравлическая система в микроманипуляторе должна работать с максимальной точностью, а микроскоп следует закреплять в очень стабильном положении.

Удаление кумулюса и corona radiata, окружающих яйцеклетку (десорбирование), — важный этап интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов (ИЦИС). Кумулюсные клетки следует удалить, чтобы они не препятствовали наблюдению за яйцеклеткой и инъекции. Можно использовать две иглы для отделения большинства кумулюсных клеток путем «срезания» кумулюса, оставляя лишь несколько клеток с гаметой. Ооциты, уже почти освобожденные от кумулюсных клеток, можно подвергнуть 30-секундному воздействию раствора обрабатывающей среды, содержащему 80 МЕ/мл гиалу-ронидазы и добавляющемуся вручную пипеткой, чтобы удалить оставшиеся клетки.
Затем ооциты сразу же промывают в обрабатывающей среде без гиалуронидазы, снова добавляемой при помощи пипетки с внутренним диаметром немного больше ооцита.

Сосуды для инъекции могут быть подготовлены разными способами. Процедуру можно осуществить в 5 мкл обрабатывающей среды с добавлением протеина и покрытием из минерального масла в небольшой чашке Петри. 5 мкл 7% раствора повидона в обрабатывающей среде можно поместить в центр сосуда для интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов (ИЦИС).

Непосредственно перед инъекцией в каплю повидона добавляют около 1 мкл суспензии сперматозоидов. Высокая вязкость этого раствора замедляет движение сперматозоидов и упрощает их обездвиживание и аспирацию. Кроме того, она предотвращает прилипание сперматозоидов к внутренней поверхности инъекционной пипетки. Во время инъекции десорбированные ооциты помещают в раствор в соотношении 1 ооцит на каплю около 5 мкл раствора повидона, содержащего обработанные сперматозоиды.
Следует добавлять в сосуд не более двух яйцеклеток одновременно во избежание длительного воздействия окружающей среды вне инкубатора.

С помощью инъекционной пипетки сперматозоиды извлекают из капли. Обнаруживают подвижный сперматозоид с нормальной морфологией, и при помощи инъекционной пипетки отсекают хвост. Затем сперматозоид аспирируют в пипетку, начиная с хвоста, подготавливая к интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов (ИЦИС), и помещают пипетку в каплю с ооцитом.

Удерживающую пипетку применяют для манипуляций с яйцеклеткой в положении с полярным тельцем под углом 12 или 6 ч условного циферблата. К пипетке прилагают давление для удержания ооцита на месте во время инъекции. Инъекционную пипетку располагают в соответствии с внешней границей оволеммы на экваториальной плоскости, соответствующей 3 ч условного циферблата.

Затем сперматозоид перемещают на кончик пипетки, которым надавливают на вителлиновый слой. Иглу вводят в вителлиновый слой и оволемму. Когда кончик пипетки проникает в оволемму, осторожно аспирируют небольшое количество овоплазмы, чтобы удостовериться в разрыве мембраны. Затем сперматозоид вводят в цитоплазму яйцеклетки, а пипетку извлекают. Следует избегать инъекций чрезмерного количества среды.

- Рекомендуем далее ознакомиться со статьей "Оценка оплодотворения ооцита при ЭКО. Критерии"

Оглавление темы "Анализ спермы, ооцитов":
  1. Хирургический забор спермы. Микрохирургическая эпидидимальная аспирация спермы (MECA)
  2. Тестикулярный забор-аспирация спермы (ТЕСА). Микроскопический тестикулярный забор спермы (микроТЕСА)
  3. Консервация сперматозоидов. Обработка ооцитов при ЭКО
  4. Забор яйцеклетки при ЭКО. Оценка состояния ооцита
  5. Созревание ооцитов in vitro при ЭКО. Гормоны
  6. ЭКО. Традиционное оплодотворение
  7. Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоидов (ИЦИС). Методика
  8. Оценка оплодотворения ооцита при ЭКО. Критерии
  9. Оценка состояния эмбриона при ЭКО. Критерии
  10. Культивирование эмбриона при ЭКО. Вспомогательное инкубирование

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: