Индекс множественных дефектов сперматозоидов. Дифференциация живых и мертвых сперматозоидов

Сперматозоиды с патологической морфологией часто имеют множественные дефекты. Ранее в протоколах фиксировался только 1 дефект, предпочтение отдавалось дефектам головки. В настоящее время часто подсчитывают индекс тератозооспермии (ИТЗ, или TZI, - teratozoospermia index), или индекс множественных аномалий (ИМА, или MAI, - multiple anomalies index), т. е. число дефектов, деленное на число патологических сперматозоидов:
ИТЗ (ИМА) = суммарное число дефектов / число сперматозоидов с дефектами.

Отдельно выделяют «дефекты головки», дефекты средней части», «дефекты хвоста». Значение ИТЗ лежит в пределах от 1,00 (каждый патологический сперматозоид имеет только 1 дефект) до 3,00 (каждый патологический сперматозоид имеет дефекты головки, средней части и хвоста).

Имеются данные, что при ИТЗ более 1,6 происходит снижение частоты наступления беременности. Вторым индексом, используемым для характеристики популяции сперматозоидов, является индекс дефектности сперматозоидов (ИДС), т. е. число дефектов, деленное на общее число сперматозоидов. ИДС 1,6 является пороговым, выше этого значения наблюдаются неудачи при оплодотворении т vitro:
ИДС = суммарное число дефектов / число подсчитанных сперматозоидов.
Этот индекс может быть больше 1, если большинство сперматозоидов имеет по нескольку дефектов.

С помощью этих индексов прогнозируется функция сперматозоидов как in vivo,, так и in vitro (фертильность эякулята). Для подсчета этих индексов можно использовать клавишные счетчики клеток крови.

Под жизнеспособностью подразумевается доля (в процентах) «живых» сперматозоидов, которые определяются либо по исключению красителя, либо по гипоосмотическому набуханию. Жизнеспособность следует определять только в том случае, если процент неподвижных сперматозоидов превышает 50%. Оценка жизнеспособности может служить контролем точности оценки подвижности сперматозоидов, поскольку процент мертвых клеток не должен превышать процента неподвижных сперматозоидов. Наличие большого количества живых, но неподвижных сперматозоидов указывает на структурные дефекты хвостиков (синдром Картагенера),
Некрозооспермия - присутствие в эякуляте более 50% мертвых сперматозоидов.

дефекты сперматозоидов

Дифференциация живых и мертвых сперматозоидов

Суправитальная окраска по Блюму проводится для дифференциации живых и мертвых сперматозоидов.
1 -и вариант - только эозин
Реактивы: эозин (К или желтый водорастворимый) - раствор 5 г/л на физиологическом растворе (WHO, 2001).
В нашей стране традиционно применяется 3% или 5% раствор эозина на дистиллированной воде.

Ход исследования
I способ. На предметном стекле смешать каплю хорошо размешанного эякулята с такой же по размеру каплей раствора эозина и покрыть препарат покровным стеклом. Исследовать препарат через 30 с при увеличении х400.
Оценку полученных результатов провести немедленно. Живые сперматозоиды - бесцветные (белые), мертвые - окрашиваются в цвет красителя.

II способ. Смешать капли спермы и раствора эозина на предметном стекле. Через 1 мин сделать мазки и высушить на воздухе. Микроскопировать под иммерсионным объективом (х90 или х100) с окуляром х10 или бинокуляром. Головки живых сперматозоидов - бесцветные, мертвых - окрашены эозином в оранжево-красный цвет.

2-й вариант - эозин-нигрозин (модификация Блюма)
Реактивы: эозин - 3% водный раствор, нигрозин - 10% водный раствор, Ход исследования:
- на предметное стекло нанести каплю хорошо размешанного эякулята; рядом поместить 2 капли раствора эозина; - каплю спермы тщательно перемешать стеклянной палочкой с каплями эозина и выдержать 30 с;
- добавить 3 капли раствора нигрозина, выдержать 30 с;
- сделать пластиковым шпателем или покровным стеклом тонкие мазки, высушить и исследовать под иммерсией (х900 или х1000);
- сосчитать 100 окрашенных и неокрашенных сперматозоидов и определить процентное соотношение живых и мертвых. Оценка теста

Живые сперматозоиды - бесцветные, мертвые - окрашены в оранжево-красный цвет. Нигрозин создает темный фон, что облегчает изучение препарата.
Нормальным считается эякулят, в котором >75% живых сперматозоидов (в рекомендациях ВОЗ - 50% и более).

- Читать далее "Тест на гипоосмотическое набухание сперматозоидов. Лейкоциты в эякуляте"

Оглавление темы "Анализ сперматозоидов. Клетки эякулята":
1. Концентрация сперматозоидов. Предварительная оценка концентрации сперматозоидов
2. Разведение спермы. Изменения концентрации сперматозоидов
3. Морфология сперматозоидов. Нормальные сперматозоиды
4. Сперматозоиды в окрашенных препаратах. Патологические формы сперматозоидов
5. Индекс множественных дефектов сперматозоидов. Дифференциация живых и мертвых сперматозоидов
6. Тест на гипоосмотическое набухание сперматозоидов. Лейкоциты в эякуляте
7. Лейкоспермия. Клетки сперматогенеза
8. Способы окраски мазков спермы. Морфология клеток в препаратах спермы
9. Остаточные тельца и макрофаги в сперме. Эритроциты в мазках спермы
10. Эпителиальные клетки в мазках спермы. Защита спермы от иммунологической агрессии

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: