На чистые слегка подогретые предметные стекла наносят тонкий равномерный мазок алкогольного раствора акридина оранжевого (разведение 1:5000). Стекла быстро высыхают, нх сохраняют в темноте до момента исследования.

Исследуемый материал из раны (взятый по методу словерхностной биопсии») наносят на предметное стекло со слоем флюорохрома. к нему добавляют каплю физиологического раствора или алкогольного раствора акридина оранжевого в разведении 1:20 000 и после смешивания накрывают препарат покровным стеклом. Изучение витальных препаратов производят тотчас же. Исследование суправитальиых препаратов отличается тем, что после нанесения мазков на флюорохромированные стекла их подсушивают на воздухе и затем сохраняют в темноте до момента микроскоппрования. Перед просмотром на мазок наносят каплю раствора акридина оранжевого в разведении 1 :20 000 и препарат накрывают покровным стеклом.

Как показали исследования М. Ф. Камаева (1970), люминесцентная микроскопия, являясь весьма чувствительным методом, дает яркую картину изменений состава и состояния клеточных элементов поверхностных слоев раны, соответствующих определенным периодам и фазам раневого процесса.

Соотношение клеточных элементов в цитологических препаратах при этом методе такое же, как при обычной методике цитологического исследования раневого отпечатка или материала «поверхностной биопсии». Однако люминесцентный метод исследования цитограмм дает возможность более точно определять степень жизнеспособности и функциональной активности клеточных элементов раны.

При использовании в качестве флюорохрома акридина оранжевого в раннем периоде раневого процесса в цитограммах обнаруживаются нормальные элементы крови — лейкоциты с изумрудно-зеленым свечением гранул. Эритроциты не дают свечения, их можно различать лишь по характерным контурам пятен темного цвета.

В дегенеративно-воспалительном периоде полиморфноядерные лейкоциты, покрывающие все поле зрения, обнаруживают ряд структурных изменений дегенеративного характера, что выражается в переходе их свечения от ярко-зеленого к желтому и оранжевому.

В регенеративном периоде (P-I-II-III) заживления раны лейкоциты по характеру свечения ядерного вещества и по структуре начинают приближаться к нормальным элементам крови. Характерной особенностью клеточных элементов типа макрофагов являются оранжевое или красное свечение их ядер и множественные гранулы в цитоплазме такого же цвета. В теле этих клеток отчетливо видны фагоцитированные фрагменты полиморфноядерных лейкоцитов с ярко-желтым или оранжевым свечением и микробные компоненты.

По современным представлениям, характер свечения различных клеточных структур отражает цитохимические процессы, которые в свою очередь связаны с функциональным состоянием клеточных элементов (В. Г. Михайлов, 1963).

Акридин оранжевый адсорбируется нуклеиновыми кислотами и нуклеопротеидами, придавая им соответствующее свечение. Ядерная ДНК дает при этом ярко-зеленое свечение, протоплазматическая РНК светится красным светом, что позволяет в известной мере идентифицировать нуклеиновые кислоты и нуклеопротеиды дезоксирибозного и рибозного типов в клеточных элементах раневого соскоба.

При деполимеризации ядерных нуклеиновых кислот, а также при понижении жизнеспособности клеток (паранекроз) и некрозе цвет свечения ядер изменяется от зеленого к красному. Такое изменение характера свечения ядер может вызываться также рядом иных обстоятельств (степень концентрации флюорохрома, показатель рН), что должно учитываться при оценке результатов люминесцентной микроскопии.

- Читать далее "Раневой секрет. Биохимия раневого секрета"