Основные принципы иммуногистохимии. Иммунофлуоресцентная (или иммунолюминесцентная) микроскопия

Говоря об основных принципах иммуногистохимии, следует подчеркнуть, что она позволяет идентифицировать in situ антигенные субстанции клеток или тканей на основе специфического взаимодействия антигена и антитела, которое выявляется с помощью соответствующей метки на светооптическом или ультраструктурном уровне.

Кроме чисто иммунологических подходов, зависящих исключительно от специфического взаимодействия антител или антигенов с тканесвязанными антигенами (или антителами), может быть также успешно использована неиммунологическая фиксация субстанций в комбинации с иммунологическими методиками (так называемый смешанный метод) или с неиммунологическим связыванием [Bosnian, 1983; Van Noorden, Polak, 1983; и др.].

В качестве маркеров, с помощью которых выявляют указанные реакции связывания, используют флуоресцентные красители (иммунофлуоресценция), энзимы (иммуноэнзиматические методики), электронно-плотные субстанции и частицы для светооптической и ультраструктурной иммуноцитохимии (с коллоидальным золотом, ферритином), а также другие частицы.

Иммунофлуоресцентная (или иммунолюминесцентная) микроскопия, как уже отмечалось, в качестве маркерного метода впервые предложена А. Н. Coons с соавторами. Она основана на мечении антитела флуоресцентным красителем — флуорохромом. Используют чаще такие флуорохромы, как флуоресцеин-изотиоцианат, тетраметил-родамин-изотиоцианат, лизамин-родамин В-200 сульфонил-хлорид, техасский красный сульфонил-хлорид.

иммуногистохимия

При прямом методе антитела, меченные флуорохромом, взаимодействуют с антигеном, связанным с тканью, и маркируют его. При непрямом методе „вторичные" антитела, меченные флуорохромом, маркируют локализацию „первичных" антител, уже связанных с тканевым антигеном и как бы выполняющих роль посредников. Используются оптимальные соотношения флуорохромов к тканевым белкам для получения небольшого излучения, которое обычно дает специфическое окрашивание искомых субстанций и которое можно всегда отличать от неспецифического фонового окрашивания.
Поскольку соединение антитела с маркером идет через химическую реакцию, последняя в известной мере может повредить структуру антитела и нарушить или извратить иммунологическую реакцию.

К числу отрицательных сторон иммунофлуоресцентной микроскопии относится непостоянство окраски искомого субстрата в тканях. Правда, сейчас этот недостаток можно преодолеть, поместив замороженный срез, окрашенный флуорохромом, в специальную заливочную, среду, например, в мовиол. Другими недостатками являются необходимость в специальном и дорогостоящем оборудовании (флуоресцентный микроскоп, криостат), а также трудности распознавания и изучения тйнких структур в ткани замороженного среза, которые не окрашиваются флуорохромами и остаются в „темном поле".
Окраска параллельных срезов или докраска исследуемых замороженных срезов обычными гистологическими красителями может выручить, но не всегда.

Попытки преодолеть указанные выше недостатки привели к широкому использованию энзимов в качестве маркеров. В настоящее время применяют пероксидазу хрена, щелочную фосфатазу, глюкозил-оксидазу, бета-галактозидазу, которые через гистохимические реакции с различными хромогенами могут выявлять в тканях всевозможные окрашенные конечные продукты [Cordell et al., 1984].

- Читать далее "Пероксидазно-антипероксидазная (ПАП) методика. Реакции с гликозил-оксидазой при опухолях"

Оглавление темы "Иммуногистохимия опухоли":
  1. Абберации хромосом опухолевых клеток. Модальное число
  2. Гистограммы распределения ДНК в опухоли. Анэуплоидные опухолевые клетки
  3. Перидиплоидные стволовые линии опухоли. Тест ядрышковых организаторов опухолевых клеток
  4. Онкофетальные антигены. Канцеро-эмбриональный антиген
  5. Альфа-фетопротеин (АФП). Иммуногистохимические маркеры дифференцировки опухоли
  6. Основные принципы иммуногистохимии. Иммунофлуоресцентная (или иммунолюминесцентная) микроскопия
  7. Пероксидазно-антипероксидазная (ПАП) методика. Реакции с гликозил-оксидазой при опухолях
  8. Хромоген для пероксидазных методик. Иммуногистохимия с щелочной фосфатазой
  9. Коллоидальное золото в иммуногистохимии опухоли. Биотин-авидиновая иммуногистохимия
  10. Иммуногистохимия по методике меченого протеина А. Оценка кариотипа опухоли

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: