Хромоген для пероксидазных методик. Иммуногистохимия с щелочной фосфатазой

Что касается самого хромогена (красителя), то чаще всего при пероксидазных методиках используют 3,3-диаминобензидин (ДАБ) в перекиси водорода. Этот хромоген дает коричневую окраску антигена, которая может быть усилена воздействием четырехокиси осмия, а также хлоридом никеля или кобальта, сернистой медью [De Jong et al., 1985; и др.].

Другими субстратами могут служить 4-хлор-1 -нафтол (дает синюю окраску, но не устойчив к этанолу), 3-амино-9-этилкарбазол (красная окраска) и р-фенилен-диамин-HCl/пирокатехол (черное окрашивание). Предлагают 1-нафтол (основной) использовать как заменитель ДАБ в иммунопероксидазных исследованиях. Продукт окисления 1-нафтола способен к связыванию основных красителей, в результате чего получаются преципитаты с характерным окрашиванием, устойчивым к воздействию этанола.

При этом наблюдаются: зелено-голубой цвет при окраске азуром А, толлуидиновым синим, крезил-виолетом, окраске по Гимза, а также темно-зеленый цвет при окраске метиловым зеленым, блу-виолетом вместе с кристалл-виолетом, фиолетовым красным с сафранином.

пероксидазные методики

При иммуногистохимических методиках с щелочной фосфатазой энзимная метка выявляется с помощью нафтолов AS-MX или AS-BI с прочным красным (красное окрашивание) или прочным синим (синее окрашивание) [Cordell et al., 1984; De Jong et al., 1985]. Активность глюкозил-оксидазы определяется с помощью субстратной среды, содержащей B-D-глюкозу: нитро-синий тетразолий и фенозин-метосульфат [Gown et al., 1986].

Пероксидаза хрена первоначально была отобрана именно как маркерный фермент, поскольку она может легко связываться с антителами и давать устойчивую красящую реакцию. Однако химические процессы связывания имеют несколько недостатков, выражающихся, в частности, в повреждении реактивности противорасположенных антител, а также энзимов. Поэтому распространилась методика неконъюгированных энзимов-антител, например, пероксидазно-антипероксидазный метод [Sternberger, 1990].

Здесь маркерный энзим фиксирован к сайту антигена, как уже говорилось, с помощью цепи антител, заменяющих химическое связывание. Повышенная чувствительность указанной методики позволяет определять антигены, включая опухолевые маркерные субстанции, в обычном гистологическом срезе с использованием ретроспективных исследований архивного материала. К тому же пригодность обычной фиксации и возможность применения докраски рутинными красителями (гематоксилин-эозин и др.) позволяет облегчить и обогатить исследования искомых антигенных и маркерных субстанций [Denk, 1997].

- Читать далее "Коллоидальное золото в иммуногистохимии опухоли. Биотин-авидиновая иммуногистохимия"

Оглавление темы "Иммуногистохимия опухоли":
  1. Абберации хромосом опухолевых клеток. Модальное число
  2. Гистограммы распределения ДНК в опухоли. Анэуплоидные опухолевые клетки
  3. Перидиплоидные стволовые линии опухоли. Тест ядрышковых организаторов опухолевых клеток
  4. Онкофетальные антигены. Канцеро-эмбриональный антиген
  5. Альфа-фетопротеин (АФП). Иммуногистохимические маркеры дифференцировки опухоли
  6. Основные принципы иммуногистохимии. Иммунофлуоресцентная (или иммунолюминесцентная) микроскопия
  7. Пероксидазно-антипероксидазная (ПАП) методика. Реакции с гликозил-оксидазой при опухолях
  8. Хромоген для пероксидазных методик. Иммуногистохимия с щелочной фосфатазой
  9. Коллоидальное золото в иммуногистохимии опухоли. Биотин-авидиновая иммуногистохимия
  10. Иммуногистохимия по методике меченого протеина А. Оценка кариотипа опухоли

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: