Гистограммы распределения ДНК в опухоли. Анэуплоидные опухолевые клетки

Гистограммы распределения ДНК в опухоли. Анэуплоидные опухолевые клетки

Несколько слов о гистограммах распределения ДНК. Интенсивность светового потока от ядер, содержащих то или иное количество ДНК, подается на уровни каналов оси абсцисс, а количество сосчитанных клеток — на уровни ординат. Анализ содержания ДНК в нормальной ткани или в определенном клоне приведет к унимодальной гистограмме ДНК: все непролиферирующие (Go) клетки, имеющиеся в популяции, будут давать единый пик в довольно остроконечной форме, включающий также все клетки в фазе G1.

Одновременное наличие нескольких пиков Gn/G1 трактуется как мультимодальное распределение ДНК. Поскольку всем непролиферирующим соматическим клеткам свойственны постоянный диплоидный набор хромосом и соответствующее распределение ДНК, все клетки в фазе Go должны прийти в один канал шкалы ДНК. Но реально при действующем разрешении в 256 каналов и пике G0/G1 в канале 60 такое идеальное распределение невозможно из-за минимальных технических погрешностей.

Если в препарате (субстрате) нет отклонений в количестве хромосом и содержании ДНК, то отраженный разброс вокруг уровня Go (выражаемый обычно как коэффициент отклонения — КО) может быть использован в качестве индикатора сохранности субстрата, качества препарата, точности измерения. Используя специальный калибровочный тест (на лимфоцитах, эритроцитах цыплят или форели) можно оптимизировать регулировку цитофотометра.

КО выражают следующим образом: КО (%)=ширина всей кривой на половине сечения пика*100/канальное значение пика*2,35.

Многочисленными исследованиями показано, что в клетках одного клона или одной стволовой линии могут иметь место минимальные отклонения в числе хромосом и содержании ДНК. Это объясняет, почему КО в злокачественных опухолях (спонтанные мутации, нестабильность генома) часто завышен без наличия погрешностей в приготовлении препарата или в измерениях [Mellin, 1990].

Кроме пика Go — G1 на унимодальных гистограммах ДНК почти всегда отмечается пик G2 + М, охватывающий клетки в фазе G2 и митозе, т. е. с удвоенной ДНК. Между двумя указанными пиками располагаются показания о клетках в S-фазе. На мультимодальных гистограммах ДНК особенно важно правильно локализовать пики Go — G1 и G2 + М, чтобы избежать ложнопозитивной идентификации анэуплоидии.

Идентификация анэуплоидных стволовых линий при совпадении нескольких анэуплоидных клонов обычно не представляет сложности. В то же время точное определение диплоидных линий требует получения дополнительных параметров исследуемых клеток, например, данных о наличии цитокератинов, об объеме цитоплазмы и т. д., поскольку указанные диплоидные линии нельзя отличить от клеток реактивных инфильтратов, имея в руках лишь один показатель содержания ДНК.

Несомненно, однако, что анэуплоидные клоны могут быть часто идентифицированы при относительно слабом разрешении (т. е. грубой количественной индикации ДНК). В такой ситуации широкий анэуплоидный пик (компьютерной гистограммы) может покрывать две или более индивидуальные анэуплоидные линии. Проблема возникает, в частности, когда относительно широкие пики G0 - G1 диплоидного ряда отражают содержание ДНК не только в клетках инфильтрата, но и у части анэуплоидных опухолевых клеток: они могут быть учтены лишь при более высоком разрешении.

- Читать далее "Перидиплоидные стволовые линии опухоли. Тест ядрышковых организаторов опухолевых клеток"

Оглавление темы "Иммуногистохимия опухоли":