Количественное определение гомоцистина в моче, а также метионина и гомоцистина в плазме может быть выполнено с помощью колоночной хроматографии на аминокислотном анализаторе. Этот анализ предусматривает установление уровня гомоцистина, гомоцистеина, метионина, цистатионина, цистина и дисульфидов гомоцистеин-цистеин. Следует иметь в виду, что в моче здоровых людей гомоцистин не определяется. У грудных детей до 1 года суточное выделение метионина с мочой составляет 1 мг, цистина - 2 мг, цистатионина - 1 мг и таурина - 20 мг.

Определение активности цистатионинсинтетазы в печени по методу Mudd и соавт. (1964). Экстракт кусочка печени, полученной при прижизненной биопсии, инкубируют с буферным раствором (рН 8,3), в состав которого входит пиридоксальфосфат, L-гомоцистеин, L-серин-ЗС и L-цистатионин. После инкубации при соответствующих условиях серии и цистатионин разделяют методом колоночной хроматографии и определяют радиоактивность цистатионина. В экстракте печени больных гомоцистинурией отсутствует энзиматическая активность, а у гетерозиготных носителей обнаруживают около 40 % активности цистатионинсинтетазы по сравнению с контролем.

Активность цистатионинсинтетазы, к сожалению, не может быть определена в лейкоцитах, эритроцитах, тромбоцитах или даже в коже. Предложен метод опредления ферментативной активности в культуре фибробластов, полученных из кожи и амниотической жидкости. У больных с гомоцистинурией она была снижена или же полностью отсутствовала.

Цианид-нитропруссидный тест (тест Бранда) направлен на выявление дефектов обмена серосодержащих аминокислот (для качественного определения цистина и гомоцистина в моче). К 0,5 мл мочи добавляется 200 мкл 5 % цианида натрия. Через 10 мин прибавляют несколько капель 5 % раствора ниртропруссида натрия. Реакция считается положительной при появлении различной степени зеленого окрашивания. Положительный тест наблюдается при гомоцистинурии, цистинурии, гипераммониемии.
- Тест Миллона. К 1 капле мочи, высушенной на фильтровальной бумаге, добавляется 1 капля реактива Миллона (10 ртути, 11 мл азотной кислоты и 22 мл дистиллированной воды). При положительной реакции образуется красно-оранжевая окраска. Тест положителен при тирозинозе, болезни Вильсона, болезни Хартнупа, галактоземии, цистинозе.
- Тест Берри положителен при некоторых типах мукополисахаридозов, но нередко дает ложноотрицательные результаты. С помощью этого теста определяют повышенную экскрецию гликозоаминогликанов.
- Тест на редуцирующие вещества (на восстановители). Во флакон с 4-5 мл свежей мочи опускаются таблетки Clintest (фирма Bayer). Появление зеленого окрашивания свидетельствует о позитивной реакции.

Тест на восстановители может выполняться с реактивом Бенедикта (проба Бенедикта). К 0,5 мл мочи добавляется 5 мл реактива Бенедикта (100 г Na2 CO3; 17,3 г лимоннокислого натрия; 17,3 г CuSO4; дистиллированная вода до 1 л), помещают в кипящую водяную баню на 5 мин. При положительной реакции появляется окрашивание от зеленого до оранжевого. Тест положителен при галактоземии, наследственной непереносимости фруктозы, синдроме Фанкони, цистинозе, врожденной непереносимости лактозы, фруктозурии.
- Тест на кетоновые тела (ацетоацетат). К 1 мл мочи добавляется 2 капли 5 % иитропру сеида натрия и по 0,5 мл 10 % NaOH и ледяной уксусной кислоты. Появление красной окраски свидетельствует о положительной реакции. Тест положителен при острых нарушениях обмена органических кислот, болезни кленового сиропа, митохондриальных болезнях, гликогенозе I, III и IV типов. Отсутствие или низкий уровень кетоновых тел в ответ на гипогликемию свидетельствует о нарушении (3-окисления жирных кислот или гликогенозе 1 типа.
- Динитрофенилгидразиновый (DNPH-тест) тест (на ос-кетокислоты). К 0,5 мл мочи добавляется 0,5 мл 0,2 % раствор DNPH. Положительная реакция проявляется желтым окрашиванием (от + до ++++). Тест положителен при болезни кленового сиропа, болезни сушеного хмеля, транзиторной тирозилурии, гиперглицинемии, лейцинозе, гликогенозах, алкаптонурии. Возможны ложноположительные результаты при кетонурии, глюкозурии.
- Нитрозонафтоловый тест позволяет вывить метаболиты тирозина при различных видах тирозинемии. Бывает положителен при галактоземии и фруктоземии.
- Сульфитный тест. Во флакон с 3-4 мл свежей мочи опускается специальная бумажная полоска Merckoquant 10013 (выпускается фирмой Merck); появление через 1 минуту зеленого окрашивания расценивается как позитивная реакция. Тест используется для ранней диагностики наследственной недостаточности сульфитоксидазы и молибденового кофактора (особенно у новорожденных и детей грудного возраста, страдающих эпилепсией).
- Тест на гомогентизиновую кислоту - положителен при алкаптонурии.

Бумажная хроматография (качественный метод) и жидкостная хроматография (количественный метод) используются для выявления нарушений обмена аминокислот, органических кислот, нарушения цикла мочевины, мито-хондриальных болезней. Этот метод предполагает одновременное исследование аминокислот крови.

Определение экскреции органических кислот с мочой с помощью метода газовой хроматографии и масс-спектометрии проводят при подозрении на наследственные нарушения аминокислот, органических кислот, обмена жирных кислот, митохондриальные болезни.
Определение уровня оротовой кислоты помогает в диагностике нарушений цикла мочевины.

Определение ацилкарнитина и ацилглицина необходимо при подозрении на дефицит карнитина, нарушение окисления жирных кислот, дефекты метаболизма органических кислот.

Тонкослойная хроматография - чувствительный и специфический метод скрининга, направленный на выявление нарушений обмена гликозаминогликанов, олигосахаридов и сиаловой кислоты и аминокислот.
Желчные кислоты определяются методом тандемной хромато-масс-спектрометрии при нарушениях их обмена (пероксисомные болезни).

- Читать далее "Исследование сыворотки в генетике. Исследование мочи в генетике"