Тест на гипоосмотическое набухание сперматозоидов. Лейкоциты в эякуляте

Тест на гипоосмотическое набухание также проводится для дифференциации живых и мертвых сперматозоидов.
Раствор для теста. Растворить 0,735 г цитрата натрия дигидрата и 1,351 г фруктозы в 100 мл дистиллированной воды, разлить в пробирки Эппендорфа по 1 мл и хранить при t -20 °С. Перед употреблением размораживать и тщательно перемешивать.

Ход исследования. Согреть 1 мл раствора в пробирке Эппендорфа в течение 5 мин при 37 °С. Добавить 0,1 мл разжиженного эякулята и перемешать пипеткой. Инкубировать смесь при 37 °С не менее 30 мин, но не более 120 мин и исследовать сперматозоиды в фазово-контрастном микроскопе.
Набухание сперматозоидов идентифицируют по изменению формы их хвостов. Считают число набухших клеток на 200 исследуемых сперматозоидов, и выводят процент набухших сперматозоидов.

Оценка теста. Результаты считаются нормальными, если произошло набухание хвоста более чем у 60% сперматозоидов. Если набухание хвоста произошло менее чем у 50% сперматозоидов, то данный образец расценивается как патологический, в котором больше половины мертвых сперматозоидов.

Примечание. Перед проведением теста на гипоосмотическое набухание необходимо подсчитать в нативном препарате количество сперматозоидов с закрученными хвостами (если они есть в эякуляте). Число сперматозоидов с закрученными хвостами вычитают из числа сперматозоидов с набухшими хвостами для получения истинного количества мертвых сперматозоидов.
Динамическое исследование эякулята не вошло в стандартные протоколы исследования ВОЗ, но продолжает производиться в некоторых КДЛ.

Исследования проводятся через 3, 6 и 24 часа после получения эякулята по стандартным методикам, определяющим следующие параметры. Через 3 и 6 часов:
• Вязкость эякулята.
• Агглютинация сперматозоидов.
• Подвижность сперматозоидов.
• Жизнеспособность сперматозоидов. Через 24 часа:
• Вязкость эякулята.
• Агглютинация сперматозоидов.
• Подвижность сперматозоидов.
• Жизнеспособность сперматозоидов.

набухание сперматозоидов

Лейкоциты в эякуляте

К круглым клеткам эякулята относят эпителиальные клетки, лейкоциты, макрофаги, незрелые половые клетки. Их количество не должно превышать 5 х 106/мл спермы.
В норме в эякуляте содержится менее 1 х 106/ мл лейкоцитов, это преимущественно нейтрофилы. Повышенное количество лейкоцитов носит название лейкоспермии. В нативном препарате эякулята нейтрофилы - это круглые, сероватые, мелкозернистые клетки диаметром 14-16 мкм. В щелочной среде спермоплазмы (рН обычно 7,5-8,0) нейтрофилы выглядят несколько крупнее, чем в крови. Если рН спермы на верхней границе нормы или превышает ее, клетки разбухают еще больше, просматривается броуновское движение нейтрофильных гранул и видны сегментированные ядра. Это особенно четко видно, если на покровное стекло нанести каплю иммерсионного масла и перевести микроскоп на иммерсионный объектив (х90 или х100). Лейкоциты считают в 100 больших квадратах камеры Горяева. Расчет проводят по формуле: L=(a*250*10*1000)/100 где L - количество лейкоцитов в 1 мл эякулята, а - количество лейкоцитов в 100 больших квадратах, 250 - 1/250-объем одного большого квадрата, 10 - степень разведения спермы, 1000 - 1000 мкл в 1 мл эякулята, 100 - количество больших квадратов.
Окончательный вариант формулы: L = а х 25 000.

Если количество лейкоцитов большое, можно считать клетки в 40 больших квадратах (20 квадратов вверху сетки и 20 - внизу). Расчет вести по формуле: L=a*250*10*1000/40.
где а - количество лейкоцитов в 40 больших квадратах, 250 - 1/250-объем одного большого квадрата, 10-степень разведения спермы, 1000 — 1000 мкл в 1 мл спермы, 40 - количество больших квадратов.

Окончательный вариант формулы: L = а х 62 500.
В руководстве ВОЗ предлагается диагностировать нейтрофилы в сперме цитохимическими методами:
1. Метод окрашивания препарата на миелопероксидазу с использованием ортотолуидина.
2. Иммуноцитохимический метод, который позволяет дифференцировать в препарате спермы макрофаги, нейтрофилы. В- и Т-лимфоциты.
Обнаружение лейко- или пиоспермии является сигналом для проведения микробиологического исследования эякулята.

- Читать далее "Лейкоспермия. Клетки сперматогенеза"

Оглавление темы "Анализ сперматозоидов. Клетки эякулята":
1. Концентрация сперматозоидов. Предварительная оценка концентрации сперматозоидов
2. Разведение спермы. Изменения концентрации сперматозоидов
3. Морфология сперматозоидов. Нормальные сперматозоиды
4. Сперматозоиды в окрашенных препаратах. Патологические формы сперматозоидов
5. Индекс множественных дефектов сперматозоидов. Дифференциация живых и мертвых сперматозоидов
6. Тест на гипоосмотическое набухание сперматозоидов. Лейкоциты в эякуляте
7. Лейкоспермия. Клетки сперматогенеза
8. Способы окраски мазков спермы. Морфология клеток в препаратах спермы
9. Остаточные тельца и макрофаги в сперме. Эритроциты в мазках спермы
10. Эпителиальные клетки в мазках спермы. Защита спермы от иммунологической агрессии

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: