Концентрация сперматозоидов. Предварительная оценка концентрации сперматозоидов

Группа анализаторов представляет классическую схему: видеомикроскоп и компьютерная система. Преимущество таких анализаторов - возможность использования микроскопа и для других целей. Однако сопряжение быстродействующей видеосистемы с высоким разрешением и стандартного микроскопа составляет некоторые проблемы, поэтому качественные показатели таких анализаторов обычно несколько ниже. Впрочем, такие анализаторы обычно значительно дешевле, а для исследования можно пользоваться стандартными многоразовыми счетными камерами. Самыми известными представителями второй группы анализаторов являются анализатор CASA CRISMAS(IMAGE HOUSE, Дания), анализаторы фирм «Celltrack» (США), «ATM» (Австрия) и др. К этой категории анализаторов относится система «Видеотест-СПЕРМ» (Видео-Тест, С.-Петербург), подробно представленная выше.

Внедрение технологии CASA в андрологических лабораториях и широкий обмен данными и опытом применения позволят стандартизировать методику, выбрать оптимальные параметры и критерии для применения ее в практике центров вспомогательной репродукции. Существующие коммерческие предложения позволяют собрать модульную установку CASA, приобрести или создать соответствующее программное обеспечение. Доступные референтные видеозаписи позволяют проводить контроль правильности работы анализатора.

В рекомендациях ВОЗ предлагается проводить предварительную оценку концентрации сперматозоидов в нативном препарате. При 400-кратном увеличении диаметр поля зрения в различных микроскопах варьирует в пределах между 250 и 400 мкм, что соответствует 1-2,5 нл при толщине препарата 20 мкм. Подсчитать диаметр поля зрения можно с помощью окуляр-микрометра или по решетке счетной камеры. Объем 1 нл соответствует 106 мл.

Если число сперматозоидов в поле зрения, соответствующем 1 нл, менее 15, эякулят разводят теплым (37 °С) физиологическим раствором 1:5, если 15-20 - 1:10, 40-200 - 1:20, более 200 -1:50 или 1:100.

сперматозоиды

В том случае если в 1 нл присутствует всего 1-2 сперматозоида, что соответствует 1-2 х 106/мл сперматозоидов, то существенно сделать запись о малом количестве сперматозоидов, а для определения их концентрации надо провести центрифугирование.

Если число сперматозоидов в каждом отдельном поле зрения колеблется значительно, это свидетельствует о негомогенности образца. Следует еще раз перемешать сперму и повторно провести подсчет. Если негомогенность сохраняется, то это следствие патологической консистенции и разжижения образца, агрегации сперматозоидов в слизи или их агглютинации. Эти изменения должны быть отмечены в бланке.

Для подсчета концентрации сперматозоидов можно использовать разнообразные счетные камеры. Чаще всего используются камера Горяева с подсчетом предварительно разведенных образцов или камера Маклера (Осипова) для подсчета сперматоцитов без предварительного разведения.

Преимущество камер без предварительного разведения - наблюдение сперматозоидов в естественной среде собственной спермоплазмы, сокращение времени подсчета, одновременный подсчет концентрации отдельных категорий. Такие камеры используются в анализаторах CASA.

Недостатки при визуальном анализе в таких камерах - сложность подсчета подвижных сперматозоидов, высокая стоимость, высокая погрешность подсчета (выше, чем у гемоцитометричес-ких камер).

Подсчет количества клеточных элементов спермы в камере Горяева. Для обездвиживания сперматозоидов и разведения спермы можно использовать 5% NaCl или раствор Барбагалло (7 мл 40% формалина и 93 мл 0,85% раствора NaCl). Так как эякулят имеет повышенную вязкость, то для взятия точного объема рекомендуется использовать стеклянные пипетки, автоматические семплеры с коническим наконечником могут привнести значительную погрешность при работе с вязкими растворами. В настоящее время доступны так называемые «позитивноперемещающие» пипетки со сменными одноразовыми наконечниками (например, PDP-Lab-systems), применяемые для ПЦР в работе с вязкими жидкостями.
Согласно рекомендациям ВОЗ подсчет проводят в 2 камерах и результат определяют как среднее 2 определений.

- Читать далее "Разведение спермы. Изменения концентрации сперматозоидов"

Оглавление темы "Анализ сперматозоидов. Клетки эякулята":
1. Концентрация сперматозоидов. Предварительная оценка концентрации сперматозоидов
2. Разведение спермы. Изменения концентрации сперматозоидов
3. Морфология сперматозоидов. Нормальные сперматозоиды
4. Сперматозоиды в окрашенных препаратах. Патологические формы сперматозоидов
5. Индекс множественных дефектов сперматозоидов. Дифференциация живых и мертвых сперматозоидов
6. Тест на гипоосмотическое набухание сперматозоидов. Лейкоциты в эякуляте
7. Лейкоспермия. Клетки сперматогенеза
8. Способы окраски мазков спермы. Морфология клеток в препаратах спермы
9. Остаточные тельца и макрофаги в сперме. Эритроциты в мазках спермы
10. Эпителиальные клетки в мазках спермы. Защита спермы от иммунологической агрессии

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: