Выделение линий первичных половых клеток. Пролиферация первичных половых клеток

Первые стабильные линии плюрипотентных EG-клеток человека были получены из первичных гоноцитов, выделенных из половых зачатков 5-9-недельных эмбрионов. Изолированные клетки культивировали на подложке инактивированных эмбриональных фибробластов мыши в среде DMEM с фетальной сывороткой, к которой добавляли меркаптоэтанол, форсколин, а также рекомбинантные ростовые факторы человека (FGF и LIF). Через 7-12 дней в культуре появились многоклеточные колонии, по морфологическим признакам и молекулярным маркерам соответствующие EG-клеткам человека.

После агрегации эти клетки формировали эмбриоидные тельца, при дальнейшем развитии которых появлялись специализированные клетки, характерные для производных всех трех зародышевых листков. На протяжении 10-20 пассажей EG-клеточные линии сохраняли нормальный кариотип и не теряли плюрипотентности (Shamblott, 1998).

Показано также, что сочетанное действие LIF, мембранносвязанного и растворимого факторов Steel, а также TGF-р изменяет программу развития первичных половых клеток. Вместо того чтобы прекратить митотические деления и начать дифференцироваться в направлении оогенеза или сперматогенеза, первичные половые клетки продолжают пролиферировать. После осуществления нескольких дополнительных митотических циклов они становятся схожими с клетками эпибласта и, теряя свойства предшественников половых клеток, преобразуются в плюрипотентные эмбриональные стволовые EG-клетки (Donovan, 1994).

первичные половые клетки

Таким образом, в 1998 году из полового зачатка фетальной аутопсийной ткани человека впервые были выделены иммортализованные линии первичных половых клеток (Shamblott et al.t 1998). В эмбриогенезе человека первичные половые клетки появляются в желточном мешке на 3-й неделе развития, а на 4-5-й неделях эти клетки мигрируют в зону полового бугорка, где образуют дормантные популяции первичных гоноцитов.
В неактивном состоянии первичные половые клетки сохраняются в зародыше вплоть до рождения.

Линии первичных половых клеток выделяются из фетального полового бугорка 5-9-недельных эмбрионов, извлеченную ткань которого ex tempore обрабатывают смесью коллагеназ IV-V типов, гиалуронидазы и ДНКазы для повышения количественно-качественного выхода клеток. Первичные половые клетки в ткани фетального полового бугорка окружены стромальными (мезенхимальными) клетками Сертоли. Функциональное предназначение клеток Сертоли заключается в продукции антиапоптозных факторов (Fas-лиганд), митогенов, а также иммуносупрессоров, защищающих половые стволовые клетки от иммунной атаки со стороны организма.

Кроме того, стромальное микроокружение полового бугорка играет важную роль в созревании гамет. Выделенные первичные половые клетки высаживают в культуру над фидерным стромальным слоем, состоящим из фетальных фибробластов первых трех пассажей. Наиболее эффективной комбинацией митогенов признан комплекс, состоящий из LIF, FGF и форсколина (стимулятор образования цАМФ). Пролиферация первичных половых клеток in vitro требует добавления фетальной сыворотки, в присутствии которой размножение первичных гоноцитов в культуре сопровождается образованием клонов шаровидных, неприкрепленных к подложке клеток.

- Читать далее "Выделение эмбриональных стволовых клеток. Среды размножения стволовых клеток"

Оглавление темы "Культура эмбриональных стволовых клеток":
1. Техника культивирования эмбриоидных телец. Гибридные клетки
2. Стволовые клетки из трофобласта. Выделение линий эмбриональных стволовых клеток
3. Техника получения линий стволовых клеток. Селекция чистой популяции стволовых клеток
4. Выделение линий первичных половых клеток. Пролиферация первичных половых клеток
5. Выделение эмбриональных стволовых клеток. Среды размножения стволовых клеток
6. Функциональная роль LIF. Влияние LIF на ткани
7. Влияние LIF на эмбрионы. Фенотипические особенности эмбриональных стволовых клеток
8. Пролиферация эмбриональных стволовых клеток. Клональный рост эмбриональных стволовых клеток
9. Состав клона эмбриональных клеток. Плюрипотентность эмбриональных стволовых клеток
10. Регенеративные возможности эмбриональных стволовых клеток. Генные маркеры клеток зародышевых листков

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: