Техника культивирования эмбриоидных телец. Гибридные клетки

Модификация техники культивирования эмбриоидных телец, полученных при агрегации EG-клеток, позволила с помощью отбора на селективных средах получить еще одну популяцию плюрипотентных клеток, названных клетками, полученными из эмбриоидных телец (embryoid body derived cells — EBD-клетки). Способность EBD-клеток длительно размножаться в культуре позволила создать стабильные клеточные линии коммитированных клеток.

Были получены клоны клеток, экспрессирующие широкий спектр мРНК и белков-маркеров специализированных клеток. Этот подход в результате доказал, что первичные половые клетки человека плюрипотентны и дифференцируются in vitro в разные типы клеток: в нейроны, нейроглию, эндотелий сосудов, гемопоэтические клетки, мышечные и энтодермальные клетки (Shamblott, 2001).

Альтернативным источником линий ЭСК человека могут быть гибридные клетки. Имплантация в матку псевдобеременных коров гетерогеномной конструкции, полученной при слиянии с помощью электропорации соматических клеток фетуса человека с яйцеклеткой коровы, из которой предварительно удаляется пронуклеус, дает возможность получить внутреннюю клеточную массу из искусственного зародыша доимплантационных стадий развития.
Для этого на первом этапе получают бластоцисту из яйцеклетки коровы с пересаженным ядром клетки человека.

эмбриоидные тельца

На втором этапе из бластоцисты выделяют эмбриобласт, а из него — ЭСК по методу Томсона. Примечательно, что наилучшие результаты по выделению линий ЭСК с помощью данного метода были получены при использовании ядер фолликулярных клеток или первичных половых клеток, сохраняющихся в организме человека в состоянии гибернации.

Это связано с тем, что пересаживаемые в яйцеклетку коровы ядра клеток человека должны иметь неукороченные теломеры и высокую активность теломеразы, что позволяет избежать преждевременного старения клонов ЭСК, получаемых из гибридной яйцеклетки {Репин, 2001). Предварительные исследования in vitro показали, что цитоплазма яйцеклеток коров восстанавливает тотипотентность генома ядер соматических клеток человека через 12-24 часа культивирования.

Определенный интерес представляют данные об особенностях доимплантационного развития зародышей человека, свидетельствующие о более позднем, чем у мышей, замещении тотипотентных клеток популяцией плюрипотентных клеток. Исследование клеточных преобразований показало, что из клеток внутренней клеточной массы бластоцист человека, помимо ЭСК, возникают и клетки трофобласта, что указывает на их тотальную потентность.

Известно, что на стадии бластоцисты возникают две по-разному коммитированные популяции клеток. Одна из них составляет наружный слой бластоцисты — трофэктодерму, производными которой являются клетки трофобласта и другие зародышевые компоненты плаценты. Вторая популяция клеток сгруппирована в плотную массу, контактирующую с внутренней поверхностью трофэктодермы.

Производными популяции клеток внутренней клеточной массы выступают все ткани и зачатки органов зародыша. На стадии поздней бластоцисты из внутренней клеточной массы формируется внезародышевая энтодерма и образуется эпибласт (первичная эктодерма). При этом клетки эпибласта сохраняют плюрипотентность, тогда как способности к дифференцировке клеток внезародышевой энтодермы ограничиваются.

- Читать далее "Стволовые клетки из трофобласта. Выделение линий эмбриональных стволовых клеток"

Оглавление темы "Культура эмбриональных стволовых клеток":
1. Техника культивирования эмбриоидных телец. Гибридные клетки
2. Стволовые клетки из трофобласта. Выделение линий эмбриональных стволовых клеток
3. Техника получения линий стволовых клеток. Селекция чистой популяции стволовых клеток
4. Выделение линий первичных половых клеток. Пролиферация первичных половых клеток
5. Выделение эмбриональных стволовых клеток. Среды размножения стволовых клеток
6. Функциональная роль LIF. Влияние LIF на ткани
7. Влияние LIF на эмбрионы. Фенотипические особенности эмбриональных стволовых клеток
8. Пролиферация эмбриональных стволовых клеток. Клональный рост эмбриональных стволовых клеток
9. Состав клона эмбриональных клеток. Плюрипотентность эмбриональных стволовых клеток
10. Регенеративные возможности эмбриональных стволовых клеток. Генные маркеры клеток зародышевых листков

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: