Серодиагностика вирусов. Реакции с мечеными антителами

РГА и РТГА. Большинство вирусов обладает способностью агглютинировать определенные эритроциты. При помощи РГА определяют также титр вируса или наибольшее его разведение, при котором еще наблюдается агглютинация эритроцитов, что соответствует одной гемагглютинирующей единице.

РГадс и РТГадс. По характеру и механизму проявления РГадс является модификацией РГА. Ставится она на инфицированных вирусами культурах клеток, вводя в монослой 0,2 мл 0,4%-й взвеси отмытых изотоническим раствором натрия хлорида стерильных эритроцитов, чувствительных к гемагглютинирующему действию предполагаемого вируса. Пробирки помещают в наклонном положении на 30 мин в термостат при 37 °С , а затем дня удаления неадсорбированных эритроцитов - во вращающийся барабан. Реакцию учитывают визуально, используя малое увеличение микроскопа. Бе считают положительной, если на клетках монослоя наблюдается диффузная или локальная адсорбция эритроцитов в виде скоплений, гроздей и розеток. При отрицательном результате на монослое адсорбируются лишь единичные эритроциты. Предварительная обработка зараженного монослоя диагностической сывороткой, нейтрализующей РГадс вирусов, получила название РТГадс.

Реакции с мечеными антителами. Мечеными называются антитела, коньюгированные с индифферентными для них веществами, которые, не изменяя их специфичности, придают иммуноглобулинам характерные свойства, что облегчает идентификацию вирусов в иммунных комплексах.

диагностика вирусов

Как «метки» наибольшее распространение получили: 1) флюорохромы, в частности флюоресцеинизотиоцианат (ФИТЦ) в реакциях иммунофлюоресценции (РИФ); 2) ферменты (чаще пероксидаза) для проведения иммуноферментного анализа (ИФА); 3) радиоактивные изотопы (125I) для радиоиммунного анализа (РИА); 4) железосодержащий белок ферритин в иммуноэлектронной микроскопии вирусов (ИЭМ).

По сравнению с РН, РТГА и РТГадс реакции с мечеными антителами отличаются более высокой чувствительностью и, что очень важно, позволяют идентифицировать вирусы даже в материалах. Вследствие этого они, как никакие другие, широко используются в экспресс-диагностике вирусных инфекций.

РИФ. Прямая РИФ - простая реакция, но для ее осуществления требуется наличие большого количества меченых антивирусных сывороток. Непрямая РИФ - более сложная реакция, постановка которой обеспечивается одной меченой антисывороткой. При этом вначале вирус связывают немеченой диагностической сывороткой, а затем образованный иммунный комплекс вирус-антитело дополнительно обрабатывают меченой ФИТЦ антисывороткой, содержащей антитела против иммуноглобулина этого комплекса.

При непрямом, более чувствительном варианте реакции люминесцирующая антисыворотка на такое же время прибавляется вслед за немеченой. Обязательными являются три контроля: 1) обработка флюоресцирующими антителами суспензии гомологичных вирусов (положительный контроль); 2) гетерологичной культуры (отрицательный); 3) незараженного материала (отрицательный).

- Читать далее "Иммуноферментный анализ - ИФА вирусов. Традиционные реакции вирусов"

Оглавление темы "Диагностика вирусных инфекций":
1. Окраска телец Бабеша-Негри и Гуарниери. Электронная микроскопия вирусов
2. Выделение вирусов из материалов. Выделение вирусов в курином эмбрионе
3. Инфицирование куриного эмбриона вирусами. Выделение вирусов в организме животных
4. Серотипаж вирусов. Реакция нейтрализации вирусов и ее модификации
5. Серодиагностика вирусов. Реакции с мечеными антителами
6. Иммуноферментный анализ - ИФА вирусов. Традиционные реакции вирусов
7. РПГ и РНГА в диагностике вирусов. Серодиагностика вирусных инфекций
8. Структура ВИЧ. Цитопатогенные эффекты ВИЧ
9. СПИД-ассоциированные пневмонии. Клинико-эпидемиологические особенности гриппа
10. Риноцитоскопия, РИФ при гриппе. Аденовирусы

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: