Иммуноферментный анализ - ИФА вирусов. Традиционные реакции вирусов

Так же, как РИФ, иммуноферментный анализ проводится в прямом и непрямом вариантах, но, в отличие от нее, используется твердофазная модификация постановки ИФА в лунках полистироловых планшет (твердая фаза), в которых сорбируются (лат. sorbere - поглощать) антитела. При этом чаще используется непрямой вариант ИФА: 1) в лунки на 30 мин при температуре 37 °С вносится содержащий вирус материал; 2) к образовавшемуся имму но комплексу на 30 мин при той же температуре добавляют антивидовой пероксидазный иммуноконьюгат; 3) для выявления образования тройного иммунопероксидазного комплекса в лунки на 10 мин вносят ортофенилендиамин с Н202 как хромогенный субстрат для пероксидазы. Результаты твердофазной модификации ИФА, которые в положительных случаях проявляются пожелтением, учитываются с помощью специального спектрофотометра.
РИА. Для проведения радиоиммунного анализа чаще всего используется конкурентный метод.

ИЭМ. Соединясь с антителами, мечеными ферритином, вирусы в иммунном комплексе, не утрачивая присущей им структуры и конфигурации, становятся электронноплотными и легко дифференцируются в электронном микроскопе.

Традиционные реакции. Перед постановкой РСК сыворотка разводится, начиная с 1:5, а взвесь вирусов и комплемент (свежая или сухая сыворотка морской свинки) титруются, так как для опыта берутся в рабочей дозе. Гемсистема готовится путем смешивания равных объемов гемолитической сыворотки в тройном титре и 3% взвеси бараньих эритроцитов по осадку с последующим выдерживанием в термостате при температуре 37 °С в течение 30 мин.

ифа вирусов

Приготовив все необходимое для реакции, берут три пробирки и в каждую вносят по 0,5 мл соответствующих ингредиентов. При этом в опытной пробирке возможны два результата реакции: 1) если в диагностической сыворотке содержатся специфические к вирусам антитела, то образованный ими иммунный комплекс свяжет комплемент и эритроциты гемсистемы останутся интактными; 2) при несоответствии сывороточных антител вирусу комплемент, оставшись свободным, присоединится к гемсистеме и вызовет лизис бараньих эритроцитов. Идентичный гемолиз должен проявиться также в двух контрольных пробирках.

Интенсивность РСК отмечается плюсами:«++++» - полная задержка гемолиза, жидкость в пробирке бесцветная, все эритроциты оседают на дно (резко положительная);«+++», «++»-слабый гемолиз, уменьшенное количество эритроцитов в осадке (положительная); «+» выраженный гемолиз, жидкость окрашена в розовый цвет, незначительное количество эритроцитов в осадке (слабоположительная );«-» - жидкость в пробирке имеет цвет артериальной, или «лаковой», крови, (отрицательная).

Чувствительность РСК повышается, если связывание комплемента проводить на холоде при температуре 4 °С в течение 18-20 ч.

- Читать далее "РПГ и РНГА в диагностике вирусов. Серодиагностика вирусных инфекций"

Оглавление темы "Диагностика вирусных инфекций":
1. Окраска телец Бабеша-Негри и Гуарниери. Электронная микроскопия вирусов
2. Выделение вирусов из материалов. Выделение вирусов в курином эмбрионе
3. Инфицирование куриного эмбриона вирусами. Выделение вирусов в организме животных
4. Серотипаж вирусов. Реакция нейтрализации вирусов и ее модификации
5. Серодиагностика вирусов. Реакции с мечеными антителами
6. Иммуноферментный анализ - ИФА вирусов. Традиционные реакции вирусов
7. РПГ и РНГА в диагностике вирусов. Серодиагностика вирусных инфекций
8. Структура ВИЧ. Цитопатогенные эффекты ВИЧ
9. СПИД-ассоциированные пневмонии. Клинико-эпидемиологические особенности гриппа
10. Риноцитоскопия, РИФ при гриппе. Аденовирусы

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: