Серотипаж вирусов. Реакция нейтрализации вирусов и ее модификации

Серотипажем называют метод определения видовой принадлежности вирусов с помощью производственных диагностических сывороток, содержащих высокий титр вируснейтрализующих антител. В серотипаже вирусов используют многие серологические реакции, но чаще всего реакцию нейтрализации (РН) вирусов и ее модификации; реакции с мечеными антителами; традиционные реакции связывания комплемента (РСК), преципитации в агаровом геле (РПГ) и непрямой гемагглютинации (РНГП).

В основе проявления всех их лежит взаимодействие вирусоспецифических антител с вирусами и их антигенами, в результате которого образуются иммунные комплексы, регистрируемые невооруженным глазом, при микроскопии, с помощью индикаторов или специальной аппаратуры, например спектрофотометра или счетчика излучений.

Реакция нейтрализации вирусов и ее модификации. РН вирусов. Классическая РН вирусов воспроизводится в трех вариантах: на культурах клеток; на куриных эмбрионах; на животных. При ее постановке взвеси инфицированных вирусом клеток, жидкостей из полостей куриного эмбриона или суспензий пораженных тканей животных смешивают с различными разведениями диагностической противовирусной сыворотки или, наоборот, разные разведения вируса добавляют к цельной неразведенной иммунной сыворотке.

реакция нейтрализации вирусов

Смеси помещают в термостат на 1-2 ч при температуре 37 °С или же в холодильник на 18 ч при температуре 4°С и вслед за этим вводят во флаконы (пробирки) с монослоем клеток, в куриные эмбрионы и организм животных. О нейтрализующей силе противовирусных антител на клеточном пласте судят по нормальному его развитию в течение 10-15 сут, а на куриных эмбрионах и животных - по выживанию и отсутствию изменений на хорионаллантоисной оболочке (2-3 сут) и в тканях животных (5-7 сут).

В тех случаях, когда идентифицируются вирусы, вызывающие обширную деструкцию клеточного пласта, РН ставят под агаровым покрытием. Для этого из флакона с монослойной культурой клеток удаляют питательную среду и заражают ее взвесью вируса. Через 30-60 мин после адсорбции вируса на клетках монослой покрывают 3%-м расплавленным агаром, содержащим лошадиную сыворотку, солевые добавки и как индикатор нейтральный красный.

Зараженную вирусом культуру клеток помещают в термостат. В контрольных флаконах при нормальном росте клеток в результате выделения ими метаболитов происходит подкисление среды и монослой равномерно окрашивается индикатором в розовый цвет. В опытных флаконах монослой пестрит - розовые участки клеток, не пораженные вирусами, перемежаются мелкими беловатыми островками-бляшками различной конфигурации, специфическими для того или иного вируса.
Идентификация вирусов по их цитопатическому и патогенному действию в классической РН требует длительного времени, немалых усилий и умения.

- Читать далее "Серодиагностика вирусов. Реакции с мечеными антителами"

Оглавление темы "Диагностика вирусных инфекций":
1. Окраска телец Бабеша-Негри и Гуарниери. Электронная микроскопия вирусов
2. Выделение вирусов из материалов. Выделение вирусов в курином эмбрионе
3. Инфицирование куриного эмбриона вирусами. Выделение вирусов в организме животных
4. Серотипаж вирусов. Реакция нейтрализации вирусов и ее модификации
5. Серодиагностика вирусов. Реакции с мечеными антителами
6. Иммуноферментный анализ - ИФА вирусов. Традиционные реакции вирусов
7. РПГ и РНГА в диагностике вирусов. Серодиагностика вирусных инфекций
8. Структура ВИЧ. Цитопатогенные эффекты ВИЧ
9. СПИД-ассоциированные пневмонии. Клинико-эпидемиологические особенности гриппа
10. Риноцитоскопия, РИФ при гриппе. Аденовирусы

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: