Выделение вирусов из материалов. Выделение вирусов в курином эмбрионе

Чаще всего из материалов вирусы выделяют в культурах клеток и куриных эмбрионах, реже ими заражают экспериментальных животных.
Выделение вирусов в культурах клеток. В большинстве случаев вирусы человека и животных выделяют на первичных культурах почек эмбрионов человека и обезьян или же на перевиваемых культурах клеток HeLa, НЕр-2, KB, Vero, FL. При этом исследуемым материалом заражают лишь те из них, в которых под малым увеличением микроскопа наблюдается хороший монослой клеток. После 30-60-минутного контакта с монослоем материал удаляют и его вновь покрывают питательной средой, помещая на несколько суток в ультратермостат.

О размножении вирусов в клетках судят по цитопатическим изменениям в монослое, выражающимся в округлении и сморщивании клеток (пикорнавирусы), нарастающей деструкции (герпесвирусы), нередко с первоначальной пролиферацией (поксвирусы). Пикорна-, герпес-, многие тога- и буньявирусы, разрушая монослой, образуют под агаровым покрытием бляшки («стерильные пятна»), каждая из которых представляет собой обособленную колонию вируса.

При размножении некоторых вирусов образуются многоядерные клетки (парамиксо- и герпес-вирусы). Целый ряд вирусов в цитоплазме и ядре формируют внутриклеточные включения округлой формы. Онкогенные вирусы вызывают трансформацию нормальных клеток в злокачественные, чему нередко предшествуют хромосомные изменения в ядрах монослоя. Пораженные инфекционными вирусами клетки обычно содержат огромное количество незрелых вирионов и их антигенов, которые выявляют с помощью флюоресцирующих антител.

Если вирусы имеют большие размеры и, размножившись, отщепляются от клеток, то в содержимом клеточного пласта под иммерсионным микроскопом, как уже отмечалось, обнаруживаются элементарные тельца.

выделение вирусов

Размножение вирусов, не обладающих цитопатическим действием (ЦПД), можно установить с помощью реакции гемадсорбции, проявляющейся в скучивании добавленных эритроцитов на инфицированных клетках вследствие наличия у многих вирусов гемагглютининов (миксо- и тогавирусы). Гемагглютинацию можно увидеть и невооруженным глазом на предметном стекле, прибавив к капле культуральной жидкости соответствующие эритроциты. Например, миксовирусы гемагглютинируют эритроциты человека, 1-й группы крови, а 60% тогавирусов - эритроциты гусей.

Ряд вирусов можно выявить по феномену интерференции, т. е. способности подавлять ЦПД другого вируса (вирусы лейкоза птиц интерферируют с вирусом саркомы Рауса). При этом, правда, надо исключить явление аутоинтерференции.

Выделение вирусов в курином эмбрионе. Для выделения вирусов из материалов используются 7-11-дневные эмбрионы белых кур. Заражение производят на хорионаллантоисную оболочку (ХАО), в аллантоисную и амниотическую полости, желточный мешок и тело зародыша. При этом выбор способа инфицирования зависит от специфических свойств вирусов.

Перед заражением яйцо помещают в овоскоп и, определив жизнеспособность эмбриона и границы воздушного мешка, спиртом и йодом обрабатывают над ним скорлупу. Наиболее распространен способ введения материала на ХАО. Для этого сбоку от воздушного мешка ножницами снимают скорлупу и слегка надрывают скорлупную оболочку. Вследствие давления воздуха ХАО западает и на нее шприцем наносят 0,1-0,2 мл исследуемого материала. Прокалывая ХАО и погружая иглу на 1-2 мм, тем же количеством материала заражают аллантоисную полость.

Для введения материала в амниотическую полость сложенными браншами пинцета осторожно прокалывают хорионаллантоис, захватывают амниотическую оболочку, приподнимают и после введения в ее полость 0,05-0,10 мл материала опускают.

- Читать далее "Инфицирование куриного эмбриона вирусами. Выделение вирусов в организме животных"

Оглавление темы "Диагностика вирусных инфекций":
1. Окраска телец Бабеша-Негри и Гуарниери. Электронная микроскопия вирусов
2. Выделение вирусов из материалов. Выделение вирусов в курином эмбрионе
3. Инфицирование куриного эмбриона вирусами. Выделение вирусов в организме животных
4. Серотипаж вирусов. Реакция нейтрализации вирусов и ее модификации
5. Серодиагностика вирусов. Реакции с мечеными антителами
6. Иммуноферментный анализ - ИФА вирусов. Традиционные реакции вирусов
7. РПГ и РНГА в диагностике вирусов. Серодиагностика вирусных инфекций
8. Структура ВИЧ. Цитопатогенные эффекты ВИЧ
9. СПИД-ассоциированные пневмонии. Клинико-эпидемиологические особенности гриппа
10. Риноцитоскопия, РИФ при гриппе. Аденовирусы

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: