Лабораторная диагностика вирусных инфекций. Микроскопическая диагностика вирусов

Лабораторная диагностика вирусных инфекций человека и животных основана на: 1) прямых микроскопических методах обнаружения вирионов в патологических материалах; 2) выделении из них чистых культур вирусов с последующей идентификацией; 3) определении вирусоспецифических антител в сыворотке крови больных и вирусоносителей. При этом материалы исследуются с помощью иммерсионного люминесцентного и электронного микроскопов; культуры вирусов выделяют, инфицируя материалами клетки куриные эмбрионы и животных; идентификацию вирусов и определение вирусоспецифических антител осуществляют, используя иммунологические (серологические) реакции.

Патологические материалы и их обработка. Материалами, в которых содержатся вирусы, могут являться: кал, моча, мокрота, носоглоточные смывы, содержимое высыпаний на коже и слизистых оболочках и прочие экскреты; кровь, спинномозговая жидкость, пунктаты (лат. punctum - прокалывать) плевральной и брюшной полости, коленного сустава, увеличенных лимфоузлов и другие секреты. От умерших людей и погибших животных берут пораженные вирусами органы и ткани. Взятые для исследования материалы при необходимости подвергаются специальной обработке для приготовления мазков и гистологических препаратов, а при инфицировании культур клеток, эмбрионов и животных измельчаются, отстаиваются, фильтруются, осветляются, обрабатываются антибиотиками для уничтожения посторонней (банальной) микрофлоры, в большом количестве находящейся в экскретах.
Используются два микроскопических способа выявления вирусов в материалах: вирусоскопия в иммерсионном и люминесцентном микроскопах и электронная микроскопия.

Вирусоскопия. В иммерсионном световом микроскопе обнаруживаются самые крупные элементарные тельца. Так, при натуральной оспе в жидкости кожных пузырьков находят вирионы Пашена, а в таких же везикулах при ветряной оспе - вирионы Арагана.

Легче при вирусных инфекциях выявить внутриклеточные включения. В основном они представлены скоплениями вирионов вперемешку с реактивными клеточными продуктами и в зависимости от места репликации вирионов находятся в цитоплазме или ядре клеток-хозяев. В частности, цитоплазматическими включениями являются тельца Гуарниери в эпителиальных клетках, скопления реовирусов и вирусов гриппа в них, тельца Бабеша-Негри - в нейроцитах, а ядерными -адено-, папова- и герпесви-русные, правда, состоящие из клеточного материала. Изредка в одной и той же клетке вирусы, например коревой, формируют цитоплазматические и ядерные включения.

вирусные инфекции

По форме, размерам, структуре, отношению к красителям вирусные включения строго специфичны. Например, тельца Гуарниери имеют округлую, серповидную или амебоидную форму диаметром 1-10 мкм, тельца Бабеша-Негри -овальные или эллипсоидные, достигающие 20 мкм, включения реовирусов серповидные, наполовину охватывающие клеточное ядро, коревые включения - в виде почкующихся мелких дрожжей.

При этом для обнаружения телец Пашена и Арагана мазки подвергают «серебрению» по методу Морозова или обрабатывают вирус нейтрализующим и антителами, мечеными флюорохромами.

Перед «серебрением» загодя готовят три раствора: N 1 - уксусно-формалиновый фиксатор (100 мл дистиллированной воды + + 1 мл ледяной уксусной кислоты + 2 мл 40%-го формалина); N 2 - танин-феноловая протрава (10 мл той же воды + 5 г танина + + 1 мл жидкого фенола); N 3 - адсорбент (свежеприготовленный 5%-й раствор нитрата серебра с добавлением нескольких капель аммиака, вызывающих легкую опалесценцию). «Серебрение» мазков выполняется в три этапа с промыванием после каждого из них водопроводной водой: мазки фиксируются раствором N 1 в течение 1 мин; протравливаются раствором N 2 с подогревом до обхождения паров; «серебрятся» раствором N 3 с подогревом до появления темно-коричневого цвета. В высушенных мазках под иммерсионным микроскопом обнаруживают грозди кокковидных вирионов коричнево-черного цвета.

В препаратах, обработанных мечеными антителами под люминесцентным микроскопом обнаруживают вне- и внутриклеточно расположенные вирионы в виде разноцветных точек и конгломератов в зависимости от природы используемого флюорохрома.
Вирусные внутриклеточные включения окрашивают по Туревичу, Муромцеву и Гимзе-Романовскому.

- Вернуться в оглавление сайта "Медицинский сайт MedicalPlanet"

Оглавление темы "Противовирусный иммунитет":
1. Клеточная ареактивность. Интерфероны и их выработка
2. Антивирусное действие интерферона. Комплемент при вирусных инфекциях
3. Антивирусная иммунная реакция. Вирусные иммуноглобулины
4. Противовирусные антитела. Клеточные факторы противовирусного иммунитета
5. История противовирусных вакцин. Создание антивирусных вакцин
6. Арбовирусы. Насекомые-переносчики фитопатогенных вирусов
7. Вакцинные штаммы вирусов. Убитые и некорпускулярные вакцины
8. Генноинженерные и антиидиопатические вакцины. Регламент прививок - прививочный календарь
9. Химиотерапия вирусных инфекций. Лекарства для лечения вирусных инфекций
10. Лабораторная диагностика вирусных инфекций. Микроскопическая диагностика вирусов

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: