В сравнительных исследованиях J. Reiffers (1987) по анализу кинетики восстановления показателей крови после пересадки костного мозга и трансплантации стволовых клеток, выделенных из периферической крови с помощью предварительной стимуляции цитостатиками, также показано преимущество последних. Однако данный метод стимуляции выхода ГСК в системный кровоток имеет и ряд существенных недостатков.

К ним, прежде всего, относятся тромбоцитопения и лейкопения, осложняющие мобилизацию, и, что особенно важно, выделение ГСК на сепараторе. Процедура сепарации стволовых клеток требует введения антикоагулянта (натрия цитрат) и вызывает контактную активацию тромбоцитов в процессе экстракорпорального центрифугирования. Эти факторы в условиях тромбоцитопении способны спровоцировать геморрагические осложнения.

Еще одним недостатком метода являются значительные индивидуальные различия в сроках начала повышения содержания стволовых клеток в периферической крови, что диктует необходимость дорогостоящего мониторинга уровня в крови гемопоэтических клеток-предшественников для определения пика концентрации, продолжающегося только 2-3 дня (Птушкин, 2000).

Следующим проблемным моментом клинического использования мобилизированных в периферическую кровь стволовых клеток, как и кроветворных клеток-предшественников, полученных из других источников, считается относительно низкая чистота их выделения, что неизбежно приводит к взаимодействию ГСК с микроокружением зрелых мононуклеарных клеток в процессе сепарации, криоконсервации и размораживания. Известно, что микроокружение кроветворных клеток является весьма гетерогенным.

В его состав входят, в частности, моноцитарно-макрофагальные клетки, которые участвуют в регуляции процессов гемопоэза как при непосредственном контакте с ГСК, так и опосредованно, секретируя регуляторные монокины. Кроме того, под влиянием криоконсервации и сразу после размораживания обратимо изменяются свойства рецепторов мембран и рецепторных сайтов, ответственных за восприятие регуляторных сигналов, а также их топография.

Такое изменение рецепторного поля неизбежно сказывается на характере и активности восприятия кроветворными клетками-предшественниками регуляторных сигналов после трансплантации реципиентам криоконсервированных ГСК, что может существенно повлиять на процессы их дальнейшей дифференцировки (Чертков, 1984).

Действительно, изучение характера воздействия макрофагов на свойства нативных и криоконсервированных стволовых клеток и влияния гуморальных факторов, секретируемых моноцитами-макрофагами в кратковременной культуре, на процессы пролиферации и дифференцировки кроветворных клеток-предшественников показало, что при введении мышам-реципиентам супернатанта 18-часовой культуры макрофагов с криоконсервированными ГСК их колониеобразующая активность снижается. Супернатант, полученный спустя 1 час после культивирования моноцитарно-макрофагальных клеток, никак не влиял на колониеобразующую активность криоконсервированных ГСК.

Введение нативных стволовых клеток с супернатантом одночасовой культуры макрофагов вызывало уменьшение количества как эритроидных, так и миелоидных колоний в 1,5 раза. Под влиянием супернатанта 18-часовой культуры макрофагов достоверно увеличивалось число колоний мегакариоцитарного типа, тогда как соотношение колоний других типов не изменялось. При введении летально облученным реципиентам продуктов секреции одночасовой культуры макрофагов совместно с криоконсервированными ГСК соотношение эритроидных и миелоидных колоний оставалось постоянным. В то же время под влиянием супернатанта 18-часовой культуры макрофагов количество эритроидных колоний достоверно увеличивалось.

При изучении синтеза белка и нуклеиновых кислот в моноцитарно-макрофагальных клетках в зависимости от продолжительности их культивирования было установлено, что скорость включения радиоактивности при использовании одно-и трехчасовой культуры не изменялась, однако достоверно возрастала (в среднем в 3 раза) скорость включения в ГСК радиоактивной метки при использовании супернатанта 18-часовой культуры макрофагов. В супернатанте, полученном спустя 18 часов после культивирования моноцитарно-макрофагальных клеток, была обнаружена синтезированная de novo белковая фракция с молекулярной массой 25 кДа. Эти данные свидетельствуют о секреции 18-часовой культурой макрофагов гуморальных факторов, участвующих в регуляции процессов кроветворения.

Воздействие моноцитарно-макрофагальных клеток на колониеобразующую активность клеток селезенки и костного мозга было более интенсивным при их непосредственном контакте с ГСК и после влияния на кроветворные клетки монокинов, продуцируемых моноцитарно-макрофагальными элементами. Эффект был более выраженным при взаимодействии моноцитарно-макрофагальных клеток с суспензией криоконсервированных ГСК, чем с нативными клетками-предшественниками гемопоэза Щуцаева и др., 2002).

- Читать далее "Изменения криоконсервированных стволовых клеток. Цитокиновая регуляция гемопоэза"