Хромосомный и генетический набор гибридных клеток. Плюрипотентность гибридных клеток

Поскольку уникальной особенностью генома цитогибридов является локализация родительских геномов в одном ядре, естественно, возникает вопрос о сохранении плюрипотентных свойств эмбрионального генома в ЭСК-соматических клеточных гибридах в условиях его тесного контакта с геномом дифференцированной клетки (Серов и др., 2001).

Морфологически цитогибриды ЭСК и соматических клеток имели сходство с родительской линией ЭСК. Оценка плюрипотентности показала, что все клоны с околодиплоидным набором хромосом были способны образовывать в суспензионных культурах эмбриоидные тельца, в которых присутствовали производные трех зародышевых листков (Matveeva et al., 1998).

Большинство гибридных клеток содержало антиген ЕСМА-7 — маркер, характерный для ранних эмбрионов мыши (Pascoe et al., 1992), а также обладало высокой активностью щелочной фосфатазы (Matveeva et al, 1998). Наиболее убедительные данные о высоких плюрипотентных свойствах гибридных клеток были получены в экспериментах по получению серии инъекционных химер с участием гибридных клеток клона HESS2 (Matveeva et al., 1998).

Анализ биохимических маркеров показал, что потомки донорских гибридных клеток находились в большинстве тканей химер. Следовательно, гибридные клетки, полученные путем слияния ЭСК и соматических дифференцированных клеток, сохраняют плюрипотентность на высоком уровне, включая способность формировать химеры при введении в полость бластоцисты (Серов и др., 2001).

гибридные клетки

Клоны HESS2 и HESS4 существенно различались по составу родительских хромосом, однако имели сходные плюрипотентные свойства. Можно было бы полагать, что плюрипотентность в гибридном геноме проявляет себя как признак доминантный, однако не исключено, что не все хромосомы эмбрионального генома вовлечены в процесс поддержания плюрипотентности.

Если такое допущение справедливо, то можно ожидать, что элиминация некоторых хромосом плюрипотентного партнера из генома гибридных клеток не будет сопровождаться изменением их плюрипотентного статуса. В этом случае анализ сегрегации родительских хромосом в эмбриональных гибридных клетках позволил бы вплотную приблизиться к идентификации хромосом, ответственных за контроль плюрипотентности эмбриональных клеток (Серов и др., 2001).

О. Серов и соавторы (2001) не обнаружили среди 50 потомков, полученных при скрещивании химер с нормальными мышами, таких, которые имели бы генотип мышей 129/01а и несли Х-хромосому мышей DD. Авторы видят причину этого в снижении плюрипотентности в гибридных клетках под влиянием соматического генома.

Альтернативным объяснением может быть негативное влияние трисомии по некоторым аутосомам и несбалансированность по половым хромосомам (XXY наблюдались в клетках до 15-го пассажа) в гибридных клетках при прохождении ими мейоза. Известно, что клетки XXY не в состоянии пройти мейоз и образовывать гаметы (Endo et al., 1991).

Трисомия способна также вызвать снижение пролиферативной активности гибридных клеток, в результате чего селективное преимущество в развитии химер может принадлежать клеткам реципиентного эмбриона (Hernandez, Fisher, 1999). Из этого следует, что для адекватной оценки плюрипотентного потенциала гибридных клеток необходимо получить гибридные клоны с нормальным диплоидным набором хромосом (Серов и др., 2001).

- Читать далее "Репрограммирование Х-хромосомы гибридных клеток. Плюрипотентность цитогибридов"

Оглавление темы "Дифференциация эмбриональных стволовых клеток":
1. Культивирование эмбриональных стволовых клеток. Участие стволовых клеток в эмбриогенезе
2. Генетически модифицированные стволовые клетки. Участие генов в дифференциации стволовых клеток
3. Гибридные клетки. Цитогибриды
4. Видовые эмбриональные гибридные клетки. Получение клонов гибридных клеток
5. Хромосомный и генетический набор гибридных клеток. Плюрипотентность гибридных клеток
6. Репрограммирование Х-хромосомы гибридных клеток. Плюрипотентность цитогибридов
7. Хромосомная память. Эффективная экспансия стволовых клеток в культуре
8. Спонтанная дифференцировка эмбриональных стволовых клеток. Дифференцировка стволовых клеток
9. Индуцированная дифференциация стволовых клеток. Направленная дифференциация стволовых клеток
10. Селективная дифференциация стволовых клеток. Регуляция дифференцировки стволовых клеток