К сожалению, до сих пор отсутствуют стандарты заготовки, а также стандартизированные протоколы клинического применения гемопоэтических клеток пуповинной крови. Соответственно и сами стволовые клетки кордовой крови не являются законодательно признанным источником кроветворных клеток для трансплантации. Кроме того, не существует ни этических, ни правовых норм, регламентирующих деятельность и организацию банков пуповинной крови, которые имеются за рубежом.

Между тем, для безопасной трансплантации все образцы пуповинной крови должны подвергаться тщательному контролю. До начала забора крови у беременной женщины необходимо получить на это ее согласие. Каждая беременная должна быть обследована на носительство HBsAg, наличие антител к вирусам гепатита С, ВИЧ-инфекции и сифилиса.

Каждый образец кордовой крови необходимо стандартно тестировать на количество ядросодержащих клеток, CD34+ и колониеобразующую способность. Кроме того, проводится HLA-типирование, определение группы крови по АВО и ее принадлежность по резус-фактору. Необходимыми процедурами тестирования являются бактериологический посев на стерильность, серологическое исследование на ВИЧ-1 и ВИЧ-2-инфекции, HBsAg, вирусный гепатит С, цитомегаловирусную инфекцию, HTLV-I и HTLV-II, сифилис и токсоплазмоз.

Помимо этого, для выявления цитомегаловирусной и ВИЧ-инфекции проводится полимеразная цепная реакция. Представляется целесообразным дополнить протоколы тестирования анализом ГСК пуповинной крови на выявление таких генетических заболеваний, как а-талассемия, серповидно-клеточная анемия, дефицит аденозиндезаминазы, агаммаглобулинемия Брутона, болезни Харлера и Понтера.

На следующем этапе подготовки к трансплантации встает вопрос о сохранении ГСК. Для уменьшения процента гибели клеток используются специальные вещества — криопротекторы. Чаще всего в качестве криопротектора применяется ДМСО в конечной концентрации 10%. Однако для ДМСО в такой концентрации характерно прямое цитотоксическое действие, которое проявляется даже в условиях минимальной экспозиции.

Снижение цитотоксического эффекта достигается жестким поддержанием нулевой температуры режима экспозиции, а также соблюдением регламента обработки материала в процессе и после размораживания (скорость проведения всех манипуляций, применения процедур многоразового отмывания). Не следует применять концентрацию ДМСО менее 5%, так как при этом в период замораживания происходит массовая гибель кроветворных клеток.

Наличие примесей эритроцитов в суспензионной смеси ГСК создает опасность развития реакции несовместимости по эритроцитарным антигенам. В то же время при удалении эритроцитов значительно возрастают потери гемопоэтических клеток. В связи с этим предложена методика нефракционированного выделения ГСК. В данном случае для защиты ядросодержащих клеток от повреждающего воздействия низких температур используют 10% раствор ДМСО и охлаждение с постоянной скоростью (ГС/мин) до -80°С, после чего клеточную взвесь замораживают в жидком азоте.

Считается, что при такой методике криоконсервации происходит частичный лизис эритроцитов, поэтому образцы крови не требуют фракционирования. Перед трансплантацией клеточную взвесь размораживают, отмывают от свободного гемоглобина и ДМСО в растворе человеческого альбумина или в сыворотке крови. Сохранность гемопоэтических предшественников при использовании данного метода действительно выше, чем после фракционирования пуповинной крови, однако опасность трансфузионных осложнений вследствие переливания АВО-несовместимых эритроцитов сохраняется.

- Читать далее "Банки стволовых клеток. Осложнения трансплантации стволовых клеток"