Акридиновый оранжевый является метахроматическим красителем, который при низких значениях рН среды связывается с ДНК бактерий и окрашивает их в оранжевый цвет. Ядра эпителиальных клеток и клеток воспалительного ряда окрашиваются в цвета от зеленого до желтого, при этом цитоплазма остается неокрашенной (ни в оранжевый, ни в зеленый цвет). Таким образом, бактерии легко идентифицируются на темном фоне как яркие оранжевые структуры.

По мнению ряда авторов, окраска акридиновым оранжевым для обнаружения бактерий в биологических жидкостях является более чувствительной, чем по Граму. Однако по нашим данным окраска только этим красителем не может использоваться в качестве единственного теста, поскольку его чувствительность, специфичность и прогностическая значимость не превышают аналогичные показатели для окраски по Граму.

Потенциальное преимущество окрашивания с помощью акридинового оранжевого состоит в возможности обнаруживать микоплазмы, однако при решении вопроса, использовать ли только данный тест, должен быть тщательно рассмотрен тот факт, что может возрасти частота ложноотрицательных диагнозов.

Лимулиновый тест околоплодных вод

Это быстрая, недорогая и чувствительная биологическая проба для обнаружения липополисахаридов бактерий. Она основана на коагуляционных свойствах лизата клеток крови (амебоцитов) мечехвоста (Limulus polyphemus) в присутствии эндотоксина.

При инфицировании околоплодных вод в них часто обнаруживаются грамотрицательные микроорганизмы. Их клеточная стенка содержат липополисахариды, которые могут быть обнаружены как при наличии живых бактерий, так и после их лизиса.

Окрашивание по Граму и лимулиновый тест имеют сравнимую точность для диагностики внутриутробной инфекции (с чувствительностью 69% и специфичностью 95%), а при их комбинированном использовании можно получить значительное увеличение чувствительности (с 69 до 96%) с небольшим снижением специфичности (с 95 до 86%). Хотя считается, что лимулиновый тест может обнаруживать только грам-отрицательные микроорганизмы, он также выявляет до 33% случаев инфицирования вод грам-положительной флорой, а также микоплазмами или кандидами.

Существует два объяснения данного явления. В этих случаях имевшиеся грамотрицательные возбудители инфекции могли быть не обнаружены при последующем культуральном исследовании из-за небольшого количества или из-за того, что они не попали в образец вод в живом виде. В последнем случае свободные липополисахариды, образовавшиеся при разрушении бактерий, могут обусловливать положительный лимулиновый тест, хотя их роста в культуре не будет. Согласно другому предположению взаимодействие с продуктами жизнедеятельности микроорганизмов может также обусловливать коагуляцию, выявляемую с помощью теста.

Так, например, пептидгликаны, как компонент грам-положительных бактерий, и маннит (представленный молекулами карбогидрата), который продуцируется грибами рода Candida, приводят к положительному лимулиновому тесту.

- Читать далее "Подсчет лейкоцитов в околоплодных водах. Определение глюкозы в амниотической жидкости"