Стандарты заготовки гемопоэтических клеток. Сохранение стволовых клеток

К сожалению, до сих пор отсутствуют стандарты заготовки, а также стандартизированные протоколы клинического применения гемопоэтических клеток пуповинной крови. Соответственно и сами стволовые клетки кордовой крови не являются законодательно признанным источником кроветворных клеток для трансплантации. Кроме того, не существует ни этических, ни правовых норм, регламентирующих деятельность и организацию банков пуповинной крови, которые имеются за рубежом.

Между тем, для безопасной трансплантации все образцы пуповинной крови должны подвергаться тщательному контролю. До начала забора крови у беременной женщины необходимо получить на это ее согласие. Каждая беременная должна быть обследована на носительство HBsAg, наличие антител к вирусам гепатита С, ВИЧ-инфекции и сифилиса.

Каждый образец кордовой крови необходимо стандартно тестировать на количество ядросодержащих клеток, CD34+ и колониеобразующую способность. Кроме того, проводится HLA-типирование, определение группы крови по АВО и ее принадлежность по резус-фактору. Необходимыми процедурами тестирования являются бактериологический посев на стерильность, серологическое исследование на ВИЧ-1 и ВИЧ-2-инфекции, HBsAg, вирусный гепатит С, цитомегаловирусную инфекцию, HTLV-I и HTLV-II, сифилис и токсоплазмоз.

Помимо этого, для выявления цитомегаловирусной и ВИЧ-инфекции проводится полимеразная цепная реакция. Представляется целесообразным дополнить протоколы тестирования анализом ГСК пуповинной крови на выявление таких генетических заболеваний, как а-талассемия, серповидно-клеточная анемия, дефицит аденозиндезаминазы, агаммаглобулинемия Брутона, болезни Харлера и Понтера.

гемопоэтические клетки

На следующем этапе подготовки к трансплантации встает вопрос о сохранении ГСК. Для уменьшения процента гибели клеток используются специальные вещества — криопротекторы. Чаще всего в качестве криопротектора применяется ДМСО в конечной концентрации 10%. Однако для ДМСО в такой концентрации характерно прямое цитотоксическое действие, которое проявляется даже в условиях минимальной экспозиции.

Снижение цитотоксического эффекта достигается жестким поддержанием нулевой температуры режима экспозиции, а также соблюдением регламента обработки материала в процессе и после размораживания (скорость проведения всех манипуляций, применения процедур многоразового отмывания). Не следует применять концентрацию ДМСО менее 5%, так как при этом в период замораживания происходит массовая гибель кроветворных клеток.

Наличие примесей эритроцитов в суспензионной смеси ГСК создает опасность развития реакции несовместимости по эритроцитарным антигенам. В то же время при удалении эритроцитов значительно возрастают потери гемопоэтических клеток. В связи с этим предложена методика нефракционированного выделения ГСК. В данном случае для защиты ядросодержащих клеток от повреждающего воздействия низких температур используют 10% раствор ДМСО и охлаждение с постоянной скоростью (ГС/мин) до -80°С, после чего клеточную взвесь замораживают в жидком азоте.

Считается, что при такой методике криоконсервации происходит частичный лизис эритроцитов, поэтому образцы крови не требуют фракционирования. Перед трансплантацией клеточную взвесь размораживают, отмывают от свободного гемоглобина и ДМСО в растворе человеческого альбумина или в сыворотке крови. Сохранность гемопоэтических предшественников при использовании данного метода действительно выше, чем после фракционирования пуповинной крови, однако опасность трансфузионных осложнений вследствие переливания АВО-несовместимых эритроцитов сохраняется.

- Читать далее "Банки стволовых клеток. Осложнения трансплантации стволовых клеток"

Оглавление темы "Стволовые клетки в медицине":
1. Регенеративно-пластическая медицина. Стволовые клетки в медицине
2. Трансплантат против хозяина. Осложнения при трансплантации костного мозга
3. Аллогенная трансплантация костного мозга. Токсичность иммунодепрессивных препаратов
4. Частота и тяжесть реакции трансплантат против хозяина. Инфекционные осложнения трансплантации костного мозга
5. Выделение гемопоэтических клеток. Источники стволовых клеток
6. Стандарты заготовки гемопоэтических клеток. Сохранение стволовых клеток
7. Банки стволовых клеток. Осложнения трансплантации стволовых клеток
8. Аутогенная трансплантация стволовых клеток. Проблемы трансплантации стволовых клеток
9. Противопоказания к трансплантации стволовых клеток. Стволовые клетки при инфаркте миокарда
10. Проблемы регенеративно-пластической медицины. Проблемы трансплантации стволовых клеток

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: