В настоящее время достигнуты определенные успехи в разработке методов выделения из костного мозга чистой популяции стволовых гемопоэтических клеток. Улучшена техника получения крови плода из пуповины и созданы методы выделения из кордовой крови кроветворных клеток.

В научной печати появляются сообщения о том, что при культивировании в средах с цитокинами гемопоэтические стволовые клетки способны к размножению. При использовании для экспансии ГСК специально сконструированных биореакторов биомасса стволовых гемопоэтических клеток, выделенных из костного мозга, периферической или пуповинной крови, существенно увеличивается.
Возможность экспансии стволовых клеток является важным шагом на пути клинического развития клеточной трансплантации (Дыбан А., Дыбан П., 2002).

Однако перед размножением стволовых клеток in vitro необходимо выделить гомогенную популяцию кроветворных стволовых клеток. Обычно это достигается с помощью маркеров, позволяющих избирательно пометить ГСК моноклональными антителами, кова-лентно связанными с флуоресцентной или магнитной меткой, и выделить их с помощью соответствующего клеточного сортера.

В то же время вопрос о фенотипических характеристиках гемопоэтических стволовых клеток окончательно не решен. А. Петренко, В. Грищенко (2003) в качестве претендентов на ГСК рассматривают клетки, на поверхности которых присутствуют CD34, АС133 и Thyl антигены и отсутствуют CD38, HLA-DR и другие маркеры дифференциации (клетки с фенотипом CD34+Lirr).

К маркерам линейной дифференцировки (lineage, Lin) относят гликофорин A (GPA), CD3, CD4, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20 (Muench, 2001). Перспективными для трансплантации считаются клетки с фенотипом CD34+CD45Ralow CD71low, а также CD34+Thyl+CD38lW/c-kit/low.

Проблемным остается вопрос о количестве стволовых клеток, достаточном для эффективной трансплантации. В настоящее время источником стволовых кроветворных клеток являются костный мозг, периферическая и кордовая кровь, а также эмбриональная печень. Экспансия стволовых гемопоэтических клеток достигается путем их культивирования в присутствии эндотелиоцитов и гемопоэтических факторов роста.

В разных протоколах для индукции пролиферации стволовых клеток применяют миелопротеины, SCF, эритропоэтин, инсулиноподобные факторы роста, кортикостероиды и эстрогены. При использовании комбинаций цитокинов in vitro можно достичь значительного увеличения пула ГСК с пиком их выхода в конце второй недели культивирования.

Традиционно стволовые клетки пуповинной крови применяют в основном при гемобластозах. Однако минимальная доза гемопоэтических клеток, необходимая для успешной трансплантации клеток кордовой крови, составляет 3,7 х 107 ядросодержащих клеток на 1 кг массы тела реципиента.

- Читать далее "Стандарты заготовки гемопоэтических клеток. Сохранение стволовых клеток"