Способы культивирования вирусов. Культуры клеток

Паразитируя на генетическом уровне как молекулы НК, вирусы, лишенные энергообменных систем, не могут, подобно бактериям, размножаться на искусственных питательных средах. Процесс их воспроизводства (репродукции) всецело обусловлен метаболизмом ограниченного круга чувствительных организмов и клеток, которые в вирусологии называют хозяевами.

Выращивают вирусы в культурах клеток или тканей, 7—13-дневных куриных эмбрионах и организме лабораторных животных, среди которых чаще всего используются белые мыши, преимущественно 1-4-дневные сосунки, кролики, сирийские хомяки и африканские хорьки.

Культура клеток - это выращенные in vitro (вне организма) на специальных средах клетки различных тканей животных и человека, в том числе лейкоциты, сохраняющие присущие им обмен и восприимчивость к определенным вирусам. Главное требование при работе с культурами клеток и вирусами - строгое соблюдение стерильности, которое достигается в асептических условиях вирусологического бокса.

Для выращивания клеток (тканей) применяют различные питательные среды (199 или Игла), содержащие полный набор необходимых им веществ (аминокислоты, пурины, пиримидины, углеводы, витамины и др.) с добавлением бычьей сыворотки.

культивирование вирусов

Имеется много типов культур клеток: 1) первичные культуры, способные к 5-10-кратному пассированию; 2) неограниченно перевиваемые; 3) полуперевиваемые, представляющие собой морфологически однородные клетки легких и почек человека, сохраняющие в 50 пассажах диплоидный набор хромосом.

Все эти типы клеток выращивают при температуре 36-37 °С в ультратермостатах, получая в течение 5-7 суток хороший монослой в виде пласта, сцепленного со стенками матрацев, флаконов и пробирок. Контролируют рост клеток под малым увеличением микроскопа, начиная с 3-4 дня.

Первичные культуры клеток. Источником получения первичных культур клеток являются обладающие большой потенцией роста эмбриональные ткани птиц (главным образом куриные фибробласты), экспериментальных животных, обезьян, но чаще всего готовят их из трипсинизированных тканей абортированных 8-14-недельных плодов человека. Для этого ткань плода измельчают ножницами на мелкие кусочки размером 2-4 мм и 2-3 раза отмывают от крови буферным раствором Хенкса, пока жидкость не станет почти прозрачной.

Затем для разрушения межклеточного вещества кусочки ткани заливают подогретым до 32-37 °С 0,25%-м раствором трипсина, и в смесителе на электромагнитной мешалке перемешивают взвесь в течение 10-30 мин. Первую порцию трипсинизированных клеток удаляют. Подходящие для культивирования вирусов клетки получают после повторных трипсинизации. Далее содержащую клетки жидкость для отделения крупных комочков ткани и соединительнотканных волокон фильтруют через марлю, центрифугируют при 800-1000 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость сливают, осадок отмывают раствором Хенкса и разводят средой 199 (или Игла), чтобы получить в 1 мл 100 000-400 000 клеток. Взвесь клеток разливают по 1 мл в пробирки или по 20-100 мл в стеклянные матрацы, плотно закрывают резиновыми пробками и помещают в термостат при температуре 37 °С. Матрацы располагают в горизонтальном положении, а пробирки -под углом 5-10° в специальных лотках. Прикрепляясь к стеклу, клетки в течение нескольких суток образуют монослой.

Перевиваемые культуры клеток. Это стабильные или, как их нередко называют, иммортализованные (бессмертные) линии клеток, автономно размножающиеся, подобно бактериям. Получают их из нормальных тканей человека (амниона - FL, А-0, А-1; почек - Rh, 1ШЧ, диплоидных клеток); животных (почек обезьян - Vero, MS, BSC-1; почек кролика - ПК и его роговицы -SIRK) и злокачественных опухолей (шейки матки- HeLa, гортани - НЕр-2, полости рта - KB, костного мозга человека - Д-6 и др.), которые выращиваются путем последовательных пассажей на питательных средах вот уже многие десятки лет.

- Читать далее "Репродуктивные варианты вирусов. Условно-дефектные вирусы"

Оглавление темы "Репродукция вирусов":
1. Способы культивирования вирусов. Культуры клеток
2. Репродуктивные варианты вирусов. Условно-дефектные вирусы
3. Дефектные интерферирующие вирусы. Интеграционные вирусы с дефектным геномом
4. Рекомбинантные вирусы. Генная инженерия
5. Конструирование генов. Выделение генов
6. Синтез генов. Передача и клонирование генов
7. Классификация, форма и строение фагов. Свойства фагов
8. Взаимодействие вирулентного фага с бактерией. Умеренные фаги
9. Трансдукция фагов. Характеристика трансдуцирующих фагов
10. Абортивная трансдукция. Происхождение и распространение фагов

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: