Антигены базальных мембран. Методы исследования базальных мембран опухоли
Базальные мембраны относят сейчас к многочисленным сложным и разнообразным структурам межклеточного матрикса. Однако ввиду их особой важности, связанной с многогранной функциональной ролью в организме, базальные мембраны и различные их субстанции рассматривают обычно отдельно от прочих структур внеклеточного матрикса. Опорная и защитная функция, роль биологического фильтра и пластины, направляющей ориентацию и дифференцировку клеток — вот неполный перечень их функций.
Ультраструктура базальных мембран, независимо от их локализации, довольно проста: различают внутренний и наружный электронно-плотный слой (или пластину) и промежуточный — светлый слой. Однако биохимическая структура довольно сложна. Хорошо известно, что матрикс соединительной ткани состоит из коллагенов, протеогликанов и гликопротеинов и что он влияет на дифференцировку и рост клеток. Есть некое биохимическое родство между матриксом и отдельными компонентами базальной мембраны.
A. Martinez-Hernandez, P. S. Amenta подразделили все субстанции, составляющие базальную мембрану, на внутренние и наружные. К внутренним авторы отнесли коллаген IV типа, ламинин, протеогликан сульфат гепарана (гепаран-сульфат) и энтактин, к наружным — фибронектин и коллаген V типа.
Для выявления базальных мембран в световом микроскопе применяют несколько гистохимических методик. Частично эти методики основаны на классической ШИК (PAS)-реакции. Так, аллохромовый метод можно использовать для выявления как ретикулиновых волокон, так и базальных мембран. Последние обнаруживаются также с помощью комплексной окраски с использованием иодно-кислого натрия, бисульфит-резорцина и фуксина [Vassa, 1985].
И ретикулиновые волокна, и базальные мембраны могут быть хорошо проконтролированы при серебрении срезов по Уайлдеру. Для изучения межклеточного матрикса используют другие способы. Преимуществами указанных методик являются возможности их применения в повседневной онкоморфологической диагностике. И они вполне отвечают целям такой диагностики. Однако для детального изучения гистохимической структуры нужны другие подходы.
Одним из них является ультраструктурно-гистохимический подход. С помощью окраски уранином, свинцом или рутением красным выявляется ультраструктура базальной мембраны. Другим, более распространенным подходом является иммуногистохимический. Сейчас используют трехслойную РАР-методику, окраску авидин-биотином и щелочной фосфатазой, а также иммунофлуоресцентные красители.
Важное преимущество таких методик — выявление точной локализации фактически любой искомой субстанции в базальной мембране, и это обеспечивается доступностью соответствующих антител. Могут применяться антитела человека против ретикулиновых волокон и субстанций базальной мембраны, но в большинстве случаев применяют экспериментально полученные антитела, как поли-, так и моноклональные. В частности, используют антитела против коллагена IV типа, против ламинина и фибронектина [Timpl et al., 1982; Ruoslahti, 1984]. В 70-е годы базальные мембраны исследовали с помощью обычной трансмиссивной электронной микроскопии, затем стали применять комбинацию из ультраструктурного и иммуногистохимического исследования.
Созданные иммуно-электронномикроскопические подходы в общем преследуют те же цели, что и обычные иммуногистохимические методики. При этом возник ряд практических проблем, связанных с соответствующими сохранением и реактивностью антител. Поскольку информация об ультраструктуре основана на разнице в электронной плотности материала, метка обычно делается электронно-плотными частицами — такими, как ферритин, коллоидальное золото и др. При таком подходе в базальной мембране были изучены коллаген IV типа, ламинин, фибронектин и эластин [Fukuda et al., 1984].
Суммировав теперь все данные о базальных мембранах и их антигенах, полученные при различных исследовательских подходах, мы последовательно рассмотрим: типы коллагена, ламинин, фибронектин, протеогликаны и протеины, а также изменения в указанных субстанциях при опухолевом процессе.
- Вернуться в оглавление раздела "Онкология"
Оглавление темы "Маркеры эндокринных опухолей":- Ферритин как маркер опухоли. Трансферрин в опухолях
- Нейроэндокринные опухоли - апудомы. Маркеры нейроэндокринных опухолей
- Энолаза нейроэндокринных опухолей. Хромогранины нейроэндокринных опухолей
- Специфические маркеры нейроэндокринных опухолей. Опухоли аденогипофиза
- Опухоли щитовидной железы. Маркеры рака щитовидной железы
- Маркеры опухоли двенадцатиперстной кишки. Маркеры меланомы и опухоли из клеток Меркеля
- Маркеры лимфом и лейкоза. Хромосомные маркеры
- Связь хромосомного маркера и гистологии опухоли. Изменения хромосом при опухолях
- Кариотип доброкачественных опухолей. Цитогенетика липом
- Антигены базальных мембран. Методы исследования базальных мембран опухоли