Иммуногистохимическое исследование нормальных тканей

Иммуногистохимическое исследование нормальных тканей - с точки зрения гистологии

а) Терминология:

1. Фиксация:
- Сохранение белков в ткани таким образом, чтобы ткань приобрела устойчивость к дальнейшим изменениям

2. Подготовка:
- Процесс обработки ткани таким образом, чтобы можно было изготовить микропрепараты

3. Иммуногистохимическое окрашивание:
- Использование меченых антител известной специфичности для обнаружения соответствующего им антигена в тканях:
• Антитело метят хромогеном, за счет этого положительная реакция определяется путем визуализации цвета:
Обычно используют коричневый или красный хромоген

- Типы окрашивания:
• Ядерное:
- Антиген экспрессирован только в ядре
- Как правило, чистое, четкое окрашивание с небольшим неспецифическим фоновым окрашиванием
• Цитоплазматическое:
- Антиген экспрессирован преимущественно в цитоплазме ± окрашивание цитоплазматической мембраны
• Мембранное:
- Антиген экспрессирован преимущественно в цитоплазматической мембране
• Смешанное:
- Антиген экспрессирован как в ядре, так и в цитоплазме
- Технические аспекты:
• Большинство антител подходят для исследования в тканях, фиксированных формалином, залитых в парафин и обработанных обычным образом:
Фиксация может снизить антигенные свойства из-за образования поперечных межмолекулярных связей в белках
- Может потребоваться восстановление эпитопов (антигенных детерминант) для демаскирования антигенов с использованием нагрева или обработки ферментами

Иммуногистохимическое исследование нормальных тканей в гистологии

(Слева) Наиболее распространенный цвет хромогена, используемый в иммуногистохимии, — коричневый. Степень экспрессии (окрашивания) сильно зависит от распределения и количества конкретного антигена. На этом изображении экспрессия панцитокератина указывает на плоскоклеточный эпителий.
(Справа) Красный хромоген чаще всего используют при иммуногистохимическом окрашивании тканей с темными пигментами (меланин), например, кожи

б) Наиболее распространенные категории антител для иммуногистохимического исследования:

1. Эпителиальные маркеры:
- Кератины широкого спектра (например, цитокератин АЕ1/АЕ3)
- СК7 (легкие, молочные железы, щитовидная железа, слюнные и другие железы)
- СК20 (желудочно-кишечный тракт и другие локализации)
- ЕМА
- Кальретинин

2. Мышечные маркеры:
- MSA
- SMA
- Десмин
- Миогенин
- MY0D1

3. Миоэпителиальные маркеры:
- Высокомолекулярные цитокератины (например, СК5/6)
- Кальпонин
- р63

4. Сосудистые маркеры:
- CD31
- CD34
- ERG
- D2-40 (эндотелий лимфатических сосудов)

(Слева) Иммуногистохимическое окрашивание антигенов, экспрессированных в ядре, обычно не сопровождается фоновым окрашиванием и легко поддается интерпретации. Примером антигенов с ядерной экспрессией служат TTF-1, рах-8, миогенин, р63 и GATA3. Цитоплазматическое окрашивание этих антигенов является артифициальным и должно игнорироваться.
(Справа) Многие антигены присутствуют только в цитоплазме клеток. Это синаптофизин, хромогранин, десмин и SMA Иммуногистохимическое исследование нормальных тканей в гистологии

(Слева) Некоторые антитела выявляют только антигены на поверхности клеточной мембраны. Классические примеры — CD-антигены, в частности CD99, CD3 и CD20, а также многие другие.
(Справа) Существует несколько антител, которые выявляют антигены как в ядре, так и в цитоплазме. К таким антигенам относятся кальретинин (показано) в мезотелиальных клетках и белок S100 в шванновских клетках

5. Маркеры нейронов:
- Белок S-100
- SOX10
- CD57
- NFP
- GFAP

6. Маркеры меланоцитов:
- Белок S-100
- SOX10
- НМВ-45
- Melan-А
- Тирозиназа

7. Нейроэндокринные маркеры:
- CD56
- Синаптофизин
- Хромогранин

8. Маркеры гемопоэтических/лимфоидных клеток:
- CD45 (общий лейкоцитарный антиген)
- CD20 (В-лимфоциты)
- CD3, CD4, CD8 (Т-лимфоциты)
- CD68, CD163 (гистиоциты)
- CD138 (плазматические клетки)

9. Гормоны:
- АКТГ
- Паратиреоидный гормон
- Инсулин
- Хорионический гонадотропин (ХГТ)
- Глюкагон
- Соматостатин
- Гастрин
- ФСГ
- ЛГ

10. Ферменты:
- Химотрипсин
- Трипсин

11. Муцины:
- MUC2
- MUC3 (тонкая кишка)
- MUC6 (желудок)

(Слева) Эпителий почти любой локализации содержит кератины широкого спектра, в частности панцитокератин и цитокератин АЕ1/АЕЗ. Экспрессия обычно выраженная [Цитоплазматическая] как продемонстрировано на срезе нормальной толстой кишки.
(Справа) В мышечных волокнах высокая экспрессия десмина и SMA. Гладкомышечные волокна также экспрессируют SMA и кальпонин. В скелетных мышцах обнаруживают ядерную экспрессию миогенина и MYOD1 Иммуногистохимическое исследование нормальных тканей в гистологии

(Слева) Белок S100 экспрессирован в различных нормальных тканях, включая нервные волокна.
(Справа) Содержание белка 5100 также типично для нормальной зрелой жировой ткани. При этом окраска кажется скорее мембранной, а не цитоплазматической из-за того, что цитоплазма клеток занята липидами, вытесняющими компоненты цитоплазмы под цитолемму

в) Антигенные свойства отдельных органов и тканей:

1. Жировая ткань:
- Белок S100
- Кальретинин

2. Кора надпочечников:
- Кальретинин
- Ингибин
- D2-40
- Синаптофизин

3. Мозговое вещество надпочечников:
- Синаптофизин
- Хромогранин
- CD56

4. Мочевой пузырь (эпителий):
- р63
- Цитокератины высокого молекулярного веса (например, 34βЕ12)
- GATA3

5. Головной и спинной мозг:
- GFAP (астроциты)
- Синаптофизин (нейроны)

6. Молочная железа:
- GATA3
- р63, SMA, кальпонин, СК5/6 (миоэпителиальные клетки)

7. Хрящ:
- Белок S100

(Слева) Выявление гормонов включает широкий спектр антител, в частности к АКТГ, ФСГ, ЛГ, СТГ и соматостатину. Представлен пример окрашивания антителами инсулина, позволяющего выделить клетки островка Лангерганса в нормальной поджелудочной железе.
(Справа) Соединительная ткань содержит разнообразные фибробластические клетки, часть которых экспрессирует SMA, а другие — CD34. CD34 обычно экспрессируется в эндотелиальных клетках Иммуногистохимическое исследование нормальных тканей в гистологии

(Слева) Маркеры, такие как СК5/6 (рисунок), кальпонин и SMA, позволяют дифференцировать миоэпителиальные или базальные клетки, окружающие нормальные протоки в молочной железе и нормальные ацинусы в простате. Утрата этих клеток в указанных тканях часто происходит при карциноме.
(Справа) Миоэпителиальные или базальные маркеры также могут экспрессироваться в ядрах. В представленном примере экспрессия рбЗ выявляет базальные клетки нормальных ацинусов предстательной железы, в то время как люминальные клетки этот маркер не экспрессируют

8. Соединительная ткань:
- SMA
- Кальпонин
- Десмин
- CD34

9. Печень:
- Hep-Parl (гепатоциты)

10. Легкие:
- TTF-1 (пневмоциты)

11. Мезотелий:
- Кальретинин
- Высокомолекулярные цитокератины (например, СК5/6)
- D2-40
- WT-1

12. Нервы:
- Белок S100
- NFP
- ЕМА (периневрий)

13. Поджелудочная железа:
- Синаптофизин, хромогранин, CD56, рах-8 (островки Лангерганса)

14. Шишковидная железа:
- Синаптофизин

15. Гипофиз:
- Различные гормональные антигены (например, гормон роста, АКТГ)
- GFAP (клетки гипофиза)

16. Простата:
- PSA
- PSAP
- р63, высокомолекулярные цитокератины (базальные клетки)

17. Скелетные мышцы:
- Миогенин
- Десмин
- MYOD1
- MSA

18. Гладкие мышцы:
- SMA
- Десмин
- MSA
- Кальпонин

19. Щитовидная железа:
- TTF-1
- рах-8
- Тиреоглобулин
- Кальцитонин (С-клетки)

20. Матка (эндометрий):
- рах-8

- Вернуться в раздел "Гистология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 8.9.2023

Оглавление темы "Нормальная гистология в диагностической патологии.":