Гистохимия (специальные окраски) - с точки зрения гистологии
а) Терминология:
1. Фиксация:
- Воздействие на белки ткани таким образом, чтобы сделать ткань устойчивой к дальнейшим изменениям
2. Обработка:
- Процесс подготовки ткани для изготовления микроскопических срезов:
• Обезвоживание, очистка, пропитывание ткани парафином, заливка, приготовление срезов ткани для микропрепаратов
3. Гистохимическое окрашивание:
- Использование химических реакций для выделения или дифференцировки различных компонентов в препарате
(Справа) Окраска муцикармином (иногда называемая окраской на муцин) выявляет кислые муцины, которые окрашиваются в ярко-розовый цвет как, например, в бокаловидных клетках эпителия тонкой кишки. Другие муцины и фоновые ткани окрашиваются в желтый цвет
б) Окрашивание ядер и цитоплазмы:
1. Гематоксилин и эозин:
- Рутинное окрашивание, наиболее часто используемое при исследовании тканей:
• Окрашивает ядра в синий/фиолетовый цвет
• Окрашивает цитоплазму в розовый цвет
2. Окраска по Фельгену:
- Окрашивает ядерную ДНК в красновато-фиолетовый цвет
3. Метиловый зеленый — пиронин Y:
- Позволяет дифференцировать ДНК и РНК
• Окрашивает ядерную ДНК в цвета от синего до зеленого
• Окрашивает цитоплазматическую РНК в цвета от розового до розово-красного
- Используется для обнаружения плазматических клеток и иммунобластов
4. По Романовскому:
- Включает в себя несколько различных модификаций окрашивания:
• По Райту
• По Гимзе
• Другие
- Позволяет дифференцировать гемопоэтические клетки по особенностям их окрашивания
(Справа) Предварительная обработка срезов ткани диастазой вызывает переваривание гликогена, устраняя ярко-розовое окрашивание, создаваемое реактивом Шиффа в тканях, которые в норме содержат этот полисахарид
(Справа) Альциановый синий выявляет кислые мукополисахариды и сульфатированные муцины, окрашивая их в синий/зеленый цвета, что продемонстрировано на срезе нормальной кишки
(Справа) Окрашивание трихромовым методом позволяет отличить соединительную ткань и коллаген от мышечной ткани. Соединительная ткань окрашивается в цвета от синего до сине-зеленого, в то время как мышечная ткань (равно как и паренхима) окрашивается в красный либо розовый цвета
в) Окрашивание углеводов:
1. Реактив Шиффа (ШИК-реакция или PAS-реакция):
- Идентифицирует полисахариды, нейтральные муцины, базальные мембраны:
• Ярко-розовое окрашивание
2. ШИК-реакция с диастазой:
- Может использоваться для демонстрации гликогена:
• Ярко-розовое окрашивание
- Диастаза ферментирует гликоген, обусловливая исчезновение окрашивания
3. Муцикармин:
- Идентифицирует кислые муцины (обычно в эпителии):
• Ярко-розовое окрашивание
- Обычно добавляется желтое контрастирующее окрашивание
4. Альциановый синий (pH 2,5):
- Идентифицирует кислые мукополисахариды, включая сульфатированные и карбоксилированные кислые мукополисахариды, а также сульфатированные и карбоксилированные сиаломуцины:
• Окрашивание от ярко-синего до сине-зеленого
5. Альциановый синий (pH 1,0):
- Идентифицирует сульфатированные муцины
• Окрашивание от ярко-синего до сине-зеленого
6. Альциановый синий с гиалуронидазой:
- Дифференцирует муцины эпителия и соединительной ткани:
• Соединительная ткань богата гиалуроновой кислотой
- Кислые мукополисахариды и сиаломуцины окрашиваются в темно-синий цвет
- Вещества, содержащие гиалуроновую кислоту и хондроитинсульфаты А и С, теряют окрашивание при обработке гиалуронидазой
7. Альциановый синий с реактивом Шиффа:
- Позволяет различать нейтральные и кислые муцины:
• Кислые слизистые субстанции окрашиваются в синий цвет
• Нейтральные полисахариды окрашиваются в пурпурный цвет
8. Коллоидное железо:
- Идентифицирует карбоксилированные и сульфатированные мукополисахариды и гликопротеины
• Окрашивает их в темно-синий цвет
(Справа) Окрашивание на эластин может быть использовано для идентификации эластических пластинок которые отделяют висцеральную плевру от периферических отделов паренхимы легких. Нарушение целостности этой структуры возможно при некоторых опухолях легких
(Справа) Окрашивание берлинской лазурью выявляет трехвалентное железо (на представленной микрофотографии — гемосидерин в ткани печени). Гранулы гемосидерина, содержащие железо, имеют вид маленьких синих гранул. В зависимости от ткани содержание железа может быть обильным либо скудным
(Справа) Окрашивание метенамином серебра по Джонсу выделяет базальную мембрану клубочков, которая приобретает черный цвет
г) Методы окрашивания соединительной ткани:
1. Трихромовый метод по Массону:
- Позволяет дифференцировать коллаген/соединительную ткань и мышцы:
• Коллаген и соединительная ткань окрашиваются в цвета от синего до сине-зеленого
• Мышцы окрашиваются в красный цвет
- Также окрашивает ядра клеток в черный цвет
2. Окрашивание на эластин:
- Выявляет эластические волокна:
• Окрашивает их в черный или темно-фиолетовый цвет в зависимости от способа окрашивания
• Содержатся в соединительных тканях, коже, легких/ плевре, артериях, венах, эластических хрящах
4. Пентахромная окраска по Мовату:
- Выявляет 5 типов тканей:
• Коллаген окрашивается в желтый цвет
• Мышцы окрашиваются в красный цвет
• Эластические волокна окрашиваются в черный цвет
• Муцины окрашиваются в синий цвет
• Фибрин окрашивается в интенсивно красный цвет
- Обычно используется при окраске соединительных тканей, сердца, кровеносных сосудов
5. Окрашивание ретикулиновых волокон:
- Выявляет ретикулиновые волокна:
• Окрашивает их в черный цвет
• Выявляются в соединительных тканях печени, костного мозга, лимфоретикулярных органах
д) Методы окрашивания мышц:
1. Фосфорно-вольфрамовая кислота и гематоксилин:
- Выявляет поперечную исчерченность мышц, фибрин и глиальные волокна:
• Голубое окрашивание
- Также окрашивает эластические волокна в фиолетовый цвет, а соединительную ткань — в цвет от оранжево-розового до коричнево-красного
е) Методы окрашивания жировой ткани:
1. Масляный красный О [Oil Red О в значительной степени заменил Sudan III и Sudan IV, поскольку он обеспечивает более глубокий красный цвет]:
- Выявляет нейтральные липиды:
• Красное окрашивание
- Используется на криостатных срезах
2. Судан черный В:
- Выявляет нейтральные липиды:
• Черное окрашивание
- Используется на срезах замороженных тканей
ж) Методы окрашивания нервов:
1. Нитрат серебра:
- Выявляет нервные волокна и нейрофибриллы:
• Окрашивает в черный цвет
2. Фосфорно-вольфрамовая кислота и гематоксилин по Мэллори:
- Выявляет глиальные нити, нейроны и миелин:
• Глиальные нити окрашиваются в синий цвет
• Нейроны окрашиваются в оранжево-розовый цвет
• Миелин окрашивается в синий цвет
3. По Кахалю:
- Выявляет астроциты:
• Черное окрашивание
4. По Вейлю:
- Выявляет миелин:
• Синее/черное окрашивание
5. Люксол быстрый голубой:
- Выявляет миелин:
• Синее окрашивание
- Также окрашивает нейропиль в розовый цвет
з) Пигменты, минералы и гранулы:
1. Берлинская лазурь:
- Выявляет трехвалентное железо (гемосидерин):
• Синее окрашивание
2. По Массону—Фонтана:
- Выявляет меланин:
• Черное окрашивание
3. По фон Коссу:
- Выявляет кальций и кальцифицированные структуры:
• Черное окрашивание
4. Роданин:
- Выявляет медь:
• Ржаво-коричневое окрашивание
и) Другие методы окрашивания:
1. Толуидиновый синий:
- Выявляет тучные клетки:
• Темно-фиолетовое окрашивание [Гликозаминогликанов и гранул тучных клеток]
2. Метенамином серебра по Джонсу:
- Выявляет базальные мембраны почечных клубочков:
• Черное окрашивание
- Сочетание метенамина серебра и реактива Шиффа
Видео этапы изготовления гистологического препарата из материала биопсии
- Читать "Иммуногистохимическое исследование нормальных тканей - с точки зрения гистологии"
Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 8.9.2023