а) Терминология:

1. Аббревиатуры:
- Иммунофлуоресценция (МФА — метод флуоресцирующих антител)

2. Определения:
- МФА позволяет обнаруживать интересующие антигены с помощью флуоресцентно меченых антител и флуоресцентного микроскопа:
• Прямой МФА:
- Первичное антитело непосредственно конъюгировано с флуоресцентным красителем для обнаружения с помощью флуоресцентной микроскопии:
о Обычно используется флуоресцеин изотиоцианат (ФИТЦ)
• Непрямой МФА:
- Первичное антитело не конъюгировано с флуоресцентным красителем
- Требуется добавление вторичного антитела, конъюгированного с флуоресцентным красителем и позволяющего обнаружить первичное антитело с помощью флуоресцентной микроскопии

б) Методология:

1. Транспортные среды:
- Михеля или Зеуса:
• Эти среды должны храниться в холодильнике до их использования
• После помещения в среду ткань до обработки может храниться при комнатной температуре вплоть до 5 дней
• Данные среды — сугубо транспортные, они не фиксируют ткани

2. Свежая ткань:
- Заливка и заморозка ткани при оптимальной температуре для изготовления срезов
- Как правило, обеспечивает более высокую чувствительность по сравнению с МФА или ИГХ, которые выполняются с использованием фиксированных формалином срезов ткани

3. Ткань, фиксированная формалином, залитая парафином:
- Важный метод сохранения тканей, когда для МФА невозможно использовать свежезамороженную ткань:
• В целом МФА в ткани, фиксированной формалином, характеризуется меньшей чувствительностью по сравнению с исследованием свежезамороженной ткани
- Требуется ферментативная обработка ткани для демаскировки антигена
- Для обработки ткани используют следующие ферменты:
• проназа
• протеиназа XXIV
• трипсин
• пепсин
• протеаза
• протеиназа К

4. Антитела:

- Первичные антитела, нередко непосредственно конъюгированные с ФИТЦ

- Антитела, используемые в клинической оценке неопухолевых биопсий (особенно почек):

• IgG:
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Исследование экспрессии субклассов IgG в повседневной практике не требуется

• IgA

• IgM

• Компонент системы комплемента С3:
В норме синтезируется в эпителиальных клетках проксимальных канальцев

• Компонент системы комплемента Clq

• Фибриноген или фибрин

• Легкая цепь каппа (κ)

• Легкая цепь лямбда (λ)

• Альбумин

• Компонент системы комплемента C4d:
Исследуют при пересадке аллотрансплантатов, как правило, почек или сердца
Выраженная и диффузная экспрессия в эндотелии капилляров указывает на антитело-опосредованное отторжение трансплантата
В норме экспрессия с картиной зернистого окрашивания в мезангиальных клетках клубочков

• α-3 и α-5 цепи коллагена IV
- Хранение препаратов:

• Внешний свет вызывает обесцвечивание:
Храните микропрепараты в темноте

в) Исследование клинического материала:

1. Почка:

- Клубочки:
• В нормальных клубочках отсутствуют иммуноглобулины или компоненты комплемента

- Мезангий:
• Гранулярное окрашивание C4d не считается патологическим
• Содержание C4d методом МФА исследуют в материале аллотрансплантатов почек

- Подоциты (висцеральные эпителиальные клетки):
• В нормальных подоцитах отсутствуют иммуноглобулины или компоненты системы комплемента
• При некоторых патологических состояниях, сопровождающихся протеинурией, можно обнаружить капли резорбированных белков:
Капли белков имеют сферический вид. Не следует их путать с иммунными комплексами, которые дают зернистое окрашивание

- Базальная мембрана клубочков:
• В норме выявление цепей α-3 и α-5 коллагена IV дает линейное окрашивание
Отсутствие цепей α-3 и α-5 коллагена IV:
о Связано с Х-сцепленным вариантом синдрома Альпорта у мужчин
Сегментарное окрашивание цепей а-3 и а-5 коллагена IV
о Связана с Х-сцепленным вариантом синдрома Альпорта у женщин

- Капсула Боумена:
• В норме присутствуют цепи а-5 и а-6 коллагена IV

- Канальцы:
• С3 синтезируется в цитоплазме эпителиальных клеток проксимальных канальцев
• Легкие цепи κ и λ, а также альбумин помогают выявлять капли реабсорбированных белков в цитоплазме эпителиальных клеток проксимальных канальцев:
Этот признак встречается при патологических состояниях, сопровождающихся протеинурией
Окрашивание моноклональных легких цепей наблюдается при проксимальной тубулопатии легких цепей

- Базальная мембрана канальцев:
• В норме экспрессия цепи α-1 коллагена IV в виде линейного окрашивания
• В норме экспрессия цепей α-3 и α-5 коллагена IV в дистальных канальцах

- Артериолы:
• В норме экспрессия С3 в виде зернистого окрашивания в эндотелиальных клетках, связанная его продукцией в цитоплазме данных клеток

- Клетки интерстициального воспаления:
• Моно- или поликлональная экспрессия κ- и/или α-легких цепей в цитоплазме

2. Кожа:

- В норме в коже отсутствует диагностически значимое содержание иммуноглобулинов или компонентов системы комплемента:
• Патологическое содержание характерно для различных везикуло-буллезных заболеваний кожи

- Базальная мембрана эпидермиса:
• В норме содержит α-1 и α-5 цепи коллагена IV, который определяется в виде линейного окрашивания:
Отсутствие экспрессии цепи а-5 коллагена IV:
о Связано с Х-сцепленным вариантом синдрома Альпорта у мужчин
Сегментарная экспрессия цепи а-5 коллагена IV:
о Ассоциирована с Х-сцепленным вариантом синдрома Альпорта у женщин
• Отсутствие α-3 цепи коллагена IV:
Не исключен аутосомный вариант синдрома Альпорта (мутации генов цепей α-3 или α-4 коллагена IV)

3. Слизистая ротовой полости:
- В норме в слизистой оболочке полости рта отсутствует диагностически значимое содержание иммуноглобулинов или компонентов системы комплемента:
• Патологическое накопление имеет место при разичных везикуло-буллезных заболеваниях

4. Легкие:
- В норме в базальных мембранах отсутствует значимое содержание иммуноглобулинов или компонентов системы комплемента:
• Выраженное накопление легких κ- и λ-цепей, проявляющееся линейным окрашиванием базальных мембран, наблюдается при поражении легких и почек антителами к коллагену IV типа базальных мембран при синдроме Гудпасчера

5. Аллотрансплантат:
- Отложения C4d в капиллярах указывает на антителоопосредованное отторжение трансплантата:
• Обычно содержание C4d исследуют в аллотрансплантатах сердца и почек:
Интерстициальное накопление C4d в аллотрансплантатах сердца неспецифична
C4d в базальной мембране атрофированных почечных канальцев неспецифична и может имитировать перитубулярные капилляры

- Читать "Электронная микроскопия - с точки зрения гистологии"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 11.9.2023