Обычно при исследовании головного мозга и нервной системы с помощью иммунопероксидазного метода препараты предварительно заключают в соответствующую среду. Однако при электронно-микроскопическом исследовании НЭС такое заключение практически не применяют, потому, в частности, что молекулы антитела, адсорбировавшие частицы золота, слишком велики, чтобы проникнуть в глубь ткани, даже когда эта ткань фиксирована и проницаема для антитела. На монослои клеток в культуре можно наносить иммунную метку до их заключения в среду, но предварительное заключение гораздо удобнее.

Возможно, иммуноцитохимию с предварительным заключением в среду можно будет использовать для выявления рецепторов на клеточной поверхности, идентифицируя лиганды, связанные с рецепторами, с помощью меченых антител. Однако пока такой метод не применяется как рутинный в целях клинической диагностики. Полезной здесь может оказаться сканирующая электронная микроскопия.

Несмотря на то, что заключению препаратов в среду должна предшествовать их фиксация, уменьшающая иммунореактивность пептидов, такие методы могут иметь ряд преимуществ. По-разному фиксируя соседние срезы, приготовленные из одного блока (таких срезов может быть несколько сотен), можно подобрать оптимальные условия для каждого антитела и пометить самые разные антигены.

Частицы коллоидного золота, связанные с пероксидазной меткой, обладают высокой электронной плотностью и благодаря своей дискретности не затеняют лежащие ниже структуры, маркированные антителом. Они могут быть разного размера, что облегчает двойное мечение. Кроме того, меченные золотом реагенты весьма стабильны.

В данной статье описаны методы работы с ультратонкими срезами, приготовленными из блоков ткани, заключенных в смолу; срезы просматривали под трансмиссионным электронным микроскопом. Мы постоянно используем эти методы в нашей лаборатории, но ими не исчерпывается весь перечень доступных методов, описанных в литературе.

Нормальные ткани. Обычно экспериментатор знает, где локализована интересующая его структура и как нужно ориентировать блоки, готовя срезы для электронной микроскопии.

Опухоли НЭС могут сильно различаться по структуре и функциональной активности. Даже в пределах одного и того же образца наблюдается неоднородное распределение типов клеток, отмечается разная секреторная активность, имеются области некроза и фиброза. Наиболее удобные для электронной микроскопии маленькие блоки (1 мм3) должны отражать морфологию опухоли. Оптимальные результаты получаются при немедленной фиксации таких блоков. Для этого используют разнообразные фиксаторы, обеспечивающие сохранность ультраструктуры ткани.

Препараты, полученные при тонкоигольной аспирационной биопсии. Учитывая все сказанное выше, приходится отметить, что иммуноцитохимия аспиратов опухолевых клеток в случае как световой, так и электронной микроскопии не очень информативна с диагностической точки зрения и подвержена влиянию многих случайных факторов. Впрочем, при нехватке ткани такие ультраструктурные исследования могут оказаться весьма полезными.

Культуры клеток. Ценную научную информацию может дать анализ культур опухолевых клеток и клеточных линий с определенным соотношением между гормонами и пептидами,

Слой клеток, выращенных на пластиковых покровных стеклах, можно соответствующим образом обработать, затем разрезать на маленькие кусочки, заключить в смолу и разрезать вдоль. Клетки на стеклянных покровных стеклах сначала инкапсулируют. Для этого заполненную смолой капсулу прижимают к стеклу и после полимеризации смолы отделяют стекло путем замораживания в жидком азоте. Слой клеток остается на поверхности блока,

Клетки можно пометить в суспензии или на покровном стекле до их фиксации и обработки, как, например, при исследовании и идентификации лигандсвязывающих рецепторов. Лиганд наносят на свежие клетки, которые фиксируют до или после добавления первого антитела.

- Читать далее "Фиксация препаратов в иммуноцитохимии. Методы фиксации в иммуноцитохимии"