а) Гистология приобретенного буллезного эпидермолиза. Рутинное гистологическое исследование очаговой кожи пациентов с ПБЭ выявляет наличие субэпидермального пузыря и выраженное отделение эпидермиса от дермы. Объем воспалительного инфильтрата в дерме, как правило, коррелирует со степенью воспаления, наблюдаемой в очаговой зоне. В очагах, напоминающих рецессивный дистрофический буллезный эпидермолиз или позднюю кожную порфирию, в дерме отмечается заметно малое число воспалительных клеток.

В случаях с клинической картиной по типу буллезного пемфигоида количество воспалительных клеток в дерме очаговой кожи значительно больше — здесь наблюдается смесь лимфоцитов, моноцитов, нейтрофилов и эозинофилов. Дифференциация приобретенного буллезного эпидермолиза (ПБЭ) по типу буллезного пемфигоида от собственно буллезного пемфигоида на основании только гистопатологических данных, может оказаться проблематичной.

б) Иммунофлюоресценция. У пациентов с приобретенным буллезным эпидермолизом (ПБЭ) присутствуют отложения IgG в зоне дермально-эпидермального соединения. Подобные отложения выявляются методом прямой иммунофлюоресценции биоптата околоочаговой кожи. Наряду с IgG в исследуемой коже также могут обнаруживаться отложения комплемента, IgA, IgM, фактора В и пропердина. Окрашивание методом прямой иммунофлюоресценции демонстрирует интенсивно флюоресцирующую полосу вдоль дермально-эпидермального соединения.

По мнению Yaoita и соавт., положительный результат прямой иммунофлюоресценции и отложения IgG под плотной пластинкой (sublamina densa) являются обязательными условиями для установления диагноза ПБЭ.

Подобно пациентам с ПБЭ, у больных поздней кожной порфирией также выявляются отложения IgG и комплемента в зоне дермально-эпидермального соединения; однако при поздней кожной порфирии иммунные отложения присутствуют и вокруг кровеносных сосудов дермы.

В крови пациентов с ПБЭ могут быть обнаружены аутоантитела, направленные против дермально-эпидермального соединения. Идентифицировать такие антитела позволяет метод непрямой иммунофлюоресценции сыворотки пациента, где в качестве субстрата используется либо пищевод обезьяны или кролика, либо кожа человека. В подобном случае наблюдается линеарное окрашивание дермально-эпидермального соединения, которое иногда невозможно отличить от результатов непрямой иммунофлюоресценции сыворотки буллезного пемфигоида.

в) Иммуноэлектронная микроскопия. Наиболее универсальным методом диагностики ПБЭ является иммуноэлектронная микроскопия, с помощью которой у пациентов с ПБЭ иммунные отложения выявляются в области дермально-эпидермального соединения. Как показано в работах Nieboer и соавт.,ь а также Yaoita и соавт., иммунные отложения при ПБЭ располагаются под плотной пластинкой зоны базальной мембраны кожи.

Выявление данной локализации отложений иммунных комплексов позволяет четко дифференцировать ПБЭ от буллезного пемфигоида, при котором подобные отложения находятся выше — в области полудесмосомы или в светлой пластинке (lamina lucida) базальной мембраны. Такая картина отличается также и от рубцующего пемфигоида, где антигенные мишени ограничены областью светлой пластинки.

г) Непрямая иммунофлюоресценция кожи, расщепленной физиологическим раствором. В препарате кожи человека, инкубированной в 1 М растворе NaCl, происходит расщепление дермально-эпидермального соединения в зоне светлой пластинки (lamina lucida). В этом случае антиген буллезного пемфигоида оказывается на эпидермальной стороне, в то время как все остальные структуры базальной мембраны остаются на дермальной стороне. При исследовании методом непрямой иммунофлюоресценции субстрат расщепленной кожи позволяет дифференцировать сыворотку ПБЭ от сыворотки буллезного пемфигоида.

Взаимодействие сывороточного IgG с эпидермальной стороной субстрата свидетельствует об отсутствии ПБЭ; в этом случае возможен диагноз буллезного пемфигоида. Взаимодействие антитела с дермальной стороной расщепленной кожи, как правило, указывает на присутствие либо ПБЭ, либо буллезной формы системной красной волчанки. Исключение второго диагноза осуществляется на основании клинических критериев и других серологических тестов.

д) Прямая иммунофлюоресценция кожи, расщепленной физиологическим раствором. Дермально-эпидермальное расщепление околоочаговой кожи с помощью холодного 1 М раствора NaCl приводит к тому, что антиген буллезного пемфигоида (и соответствующие иммунные отложения) оказывается на эпидермальной стороне препарата, в то время как антиген ПБЭ (и соответствующие иммунные отложения) размещается на дермальной стороне препарата. В случаях ПБЭ с помощью прямой иммунофлюоресценции с использованием конъюгат меченных флюоресцеином антител к IgG человека иммунные отложения выявляются на дермальной стороне расслоения.

е) Вестерн-блоттинг. В ходе анализа методом иммуноблоттинга сывороточные антитела больных ПБЭ связываются с полосой 290 кДа вестерн блотов белков базальной мембраны кожи человека, содержащих коллаген типа VII. Исследования сывороток пациентов с другими первичными пузырными заболеваниями к подобному результату не приводят. Полоса 250 кДа соответствует a-цепи коллагена типа VII. Антитела ПБЭ также нередко маркируют полосу 145 кДа, соответствующую аминовому концевому глобулярному домену NC-1 на a-цепи коллагена типа VII.

Данный домен богат углеводами и содержит антигенные эпитопы аутоантител ПБЭ, аутоантител буллезной формы системной красной волчанки и моноклональных антител против коллагена типа VII.

ж) Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA). Chen и соавт. синтезировали несколько миллиграмм рекомбинантного очищенного посттрасляционно-модифицированного NC-1 в стабильно трансфицированных клетках человека и использовали этот NC-1 для разработки твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), призванного идентифицировать аутоантитела у пациентов с ПБЭ и буллезной формой системной красной волчанки. По сравнению с иммунофлюоресценцией и вестерн-блоттингом, твердофазный иммуноферментный анализ характеризуется большей чувствительностью и является высокоспецифичным тестом по отношению к антителам коллагена типа VII.

- Рекомендуем далее ознакомиться со статьей "Дифференцциальная диагностика приобретенного буллезного эпидермолиза"

1. Причины и механизмы развития приобретенного буллезного эпидермолиза
2. Симптомы и клиника приобретенного буллезного эпидермолиза
3. Анализы и гистология буллезного эпидермолиза
4. Дифференцциальная диагностика приобретенного буллезного эпидермолиза
5. Лечение приобретенного буллезного эпидермолиза