Для постановки этого опыта необходимо иметь тщательно высушенный стерильный пластинчатый мясопептонный агар (МПА) как подложку. Для выделения фага 1 мл испытуемого фильтрата, разведенного бульоном 1:10, 1:100, 1:1000, и 0,1 мл фагочувствительной культуры бактерий поочередно вносят в пробирку с 2,5 мл расплавленного 0,7%-го агара и, хорошо перемешав ее содержимое, выливают в чашки Петри на поверхность подготовленного 1,5%-го агара. После равномерного распределения смеси для уплотнения полужидкого агара чашки Петри оставляют на 30 мин при комнатной температуре, а затем на сутки помещают в термостат при 37 °С. При небольшом количестве корпускул фага в бактериальном газоне обнаруживаются отдельные негативные колонии, при большой концентрации фага - диффузный или даже сплошной лизис культуры.

Титр фага выражают максимальным разведением, в котором проявляется его литическое действие. Более точные данные об активности фага получают, определив количество активных фаговых корпускул в единице объема. Для этого разные разведения фага засевают в две параллельные чашки Петри и после 18 ч пребывания их в термостате подсчитывают количество негативных колоний, умножая на разведение. Например, при исследовании по методу Грациа на чашках, в которые вносили 1 мл фага в разведении 10-7, было обнаружено 25 колоний. Следовательно, титр фага (количество корпускул в 1 мл) равен 25 * 107 или 2,5-108.

К вирусам с двухцепочечной сегментированной РНК относят вирус раневой опухоли, геном которого состоит из 11 фрагментов, и сходные с ним вирусы карликовости кукурузы и риса, сахарного тростника островов Фиджи и измельченности початков кукурузы.

Как уже упоминалось, вироиды открыл в 1972 г. Т. Дайнер. Являясь трансмиссибельными субвирусными агентами с неполными для вирусов свойствами (лат. sub), они вызывают 11 заболеваний у растений: веретенообразность клубней картофеля, карликовость хризантем, хмеля и лопуха, бледность огурца, экзокортис цитрусовых, хлоротическую крапчатость вишни, солнечные ожоги авокадо, кустистость верхушек томатов, болезнь гиганта махо томатов и болезнь Каданга-Каданга кокосовых пальм.

Вироиды представляют собой маленькие ковалентно-замкнутые кольцевые молекулы РНК, не содержащие ни белка, ни капсида. Их особенностью является то, что у них нарушены функции репликации и созревания. «Геномы» вироидов содержат всего лишь несколько сотен нуклеотидов, например вироид веретеновидности клубней картофеля состоит из 359 нуклеотидов, а вироид экзокортиса цитрусовых - примерно из 400 нуклеотидов. Вследствие этого трудно представить, что эти маленькие РНК могут функционировать как иРНК. Скорее всего они являются регуляторными элементами. Допускается, что они вызывают в зараженных ими клетках образование новых копий, стимулируя транскрипцию каких-то генов.

Распространение вирусов по растению. Введенные в клетки растений фитопатогенные вирусы сначала размножаются в них локально. Когда вирусы, наконец, проникают в проводящую ткань, то сначала быстро движутся по жилкам к основанию листовой пластинки, затем по черешку в стебель. Как правило, вирусом атакуются прежде всего активно растущие клетки листа, стебля и корней растений.

Репликация вирусов. Так же, как у вирусов позвоночных, репликация фитопатогенных вирионов в клетках происходит вскоре после освобождения их РНК от белковой оболочки. При этом у одних вирусов (ВТМ) отмечается декапсидирование, а у других (вирус желтой мозаики турнепса) она освобождается без разрушения белковой оболочки. Вслед за депротеинизацией в зараженных клетках появляются репликативные и промежуточные репликативные формы РНК. Катализируется репликация РНК у фитопатогенных вирусов, по-видимому, специфическими полимеразами, но как это происходит в действительности - неизвестно. Предполагается, что РНК ВТМ с молекулярной массой 2,3 • 106 способна кодировать синтез нескольких белков, в том числе белка оболочки, но in vitro он не образуется ни в бесклеточной системе из зародышей пшеницы, ни в ооцитах, которые использовались для изучения его репродукции.

Созревание вирусов начинается через 4-5 ч после заражения растений. Первичным местом репликации РНК большинства вирусов растений, вероятно, является ядро, а полное формирование их вирионов завершается в цитоплазме.

- Читать далее "Особенности сборки вирионов растений. Цитопатогенное действие вирусов"