Обследование иммунитета при раке молочной железы. Методы выделения антигенных комплексов

Перечень методов, используемых для обследованных больных раком молочной железы, включает в себя, в частности, кожные реакции ГЗТ на туберкулин, ДНХБ, определение иммуноглобулинов классов Л, М и G и метод спонтанного розеткообразования.

Кроме того, для характеристики особенностей иммунного ответа на антигенные компоненты злокачественной опухоли использованы кожные реакции ГЗТ на антигенные комплексы, выделенные из ткани рака молочной железы и из эмбриональных тканей. О степени напряженности гуморального ответа и о его наличии судили но уровню циркулирующих антител к опухолеассоциированным антигенам, выявляемому пефелометрическим методом. Параллельно изучалась картина периферической крови общепринятыми методами.

Материалом для их извлечения служила опухолевая ткань, полученная в результате мастэктомии больных, имевших различную степень распространения опухолевого процесса и не получавших ранее противоопухолевой терапии. Во всех случаях диагноз имел гистологическое подтверждение. Материал хранили при —30°С, все процедуры по выделению комплекса, кроме особо оговоренных, проводили при +4°С.

Опухоль очищали от окружающей ткани, многократно промывали физиологическим раствором и измельчали. Антигенный комплекс получали двумя способами: водно-фенольной экстракцией и водно-солевым извлечением.
1. Метод горячей водно- фенольной экстракции. Измельченную ткань обезжиривали смесью хлороформ-метанол (1:1) в аппарате Сокслета и экстрагировали трехкратным (3 мл на 1 л) объемом дистилпрованной воды 20 минут при 65°С. Экстракт смешивали с равным объемом фенола, насыщенного водой, и перемешивали 20 минут при 65°С. Осадок отделяли центрифугированием (5000 об/мин, 20 минут). Супернатант диализовали против дистиллированной воды в течение 3 суток и концентрировали до небольшого объема. Антигенный комплекс осаждали десятикратным объемом 2%-ного спиртового раствора ацетата натрия. После центрифугирования (2500 об/мин, 20 минут) его трижды промывали смесью эфир-этанол (1:1), растворяли в небольшом объеме дистиллированной воды и лиофилизовали.

2. Метод водно-солевой экстракции. Измельченную ткань обезжиривали десятикратным объемом ацетона или смеси хлороформа с метанолом (9:1), повторяя эту операцию 3—5 раз до получения бесцветного экстракта. Ткань отфильтровывали, промывали небольшим количеством эфира и высушивали в вакууме. Обработанный таким образом материал может храниться месяцами при—10°С. Экстракцию антигенного комплекса проводили водой (А), физиологическим раствором (Б), 0.1 М натрийфосфатным буфером (В), рН 7,0 и 3 М раствором хлористого калия в буфере В (Г). Ткань смешивали с водой или солевым раствором (на 1 г сухой ткани 3—5 мл экстрагирующего раствора) и гомогенизировали (8000 об/мин, 10 минут) в ножевом гомогенизаторе РТ-1 (СССР). Осадок отделяли центрифугированием (8000 об/мин, 30 минут). Процедуру экстрагирования повторяли дважды.

рак молочной железы

Супернатанты объединяли, и при перемешивании к ним небольшими порциями добавляли равный объем 2 М хлорной кислоты, поддерживая температуру не выше 4°С. При этой же температуре продолжали перемешивание еще 20 минут. Выпавший осадок отделяли центрифугированием (8000 об/мин, 20 минут), супернатант диализировали против проточной воды до рН 6,0, а затем против дестиллированной в течение суток. Образовавшийся осадок удаляли центрифугированием (8000 об/мин, 20 минут) и супернатант лнофилизовали.

Для стерилизации лиофилизованный экстракт, полученный методом водно-фенольной или водно-солевой экстракции, перемешивали с этанолом (10 мл на 1 г экстракта) в течение 1 часа, осадок отделяли цен-рифугировапием (1000 об/мин, 20 минут). Обработку повторяли трижды, затем осадок высушивали в вакууме.

Бактериальную стерильность испытывали посевами на мясопептониый бульон, мясопептонный агар, сахарный бульон и среду Тароцци.

Проверку на токсичность проводили инъекциями препаратов мышам по 0,1 мл антигенного комплекса в концентрации 2 мг/мл внутрикожно и 0,5 мл подкожно.

- Вернуться в оглавление раздела "Онкология"

Оглавление темы "Онкоиммунология":
  1. Антигены рака как маркер. Специфический противоопухолевый иммунитет
  2. Специфичные опухолевые антигены. Антигенный спектр опухолей
  3. Эмбриональные антигены опухолей. Классификация эмбриональных антигенов
  4. Онкоиммунология. Иммунитет онкологических больных
  5. Иммунодиагностика злокачественных опухолей. Антигенные маркеры опухолей
  6. Антигены крови при контакте с канцерогенами. Оценка состояния иммунитета в онкологии
  7. Аллергические реакции на опухоли. Аллергические кожные пробы в онкологии
  8. Тесты оценки иммунологической реактивности. Оценка гуморального иммунитета
  9. Направления развития онкоиммунологии. Модели рака молочной железы
  10. Обследование иммунитета при раке молочной железы. Методы выделения антигенных комплексов

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: