Заливка тканей для исследования. Блоки препаратов

Заливка тканей для исследования. Блоки препаратов

Для облегчения резки ткани обычно заливают в твердую среду. Чтобы с помощью микротома получить тонкие срезы, ткани после фиксации должны быть пропитаны заливочными веществами, которые придают им твердую консистенцию. В качестве заливочных материалов используют парафин и пластические смолы. Парафин обычно применяют для световой микроскопии, смолы — как для световой, так и для электронной микроскопии.

Процессу заливки в парафин, или пропитывания ткани, обычно предшествуют два главных этапа: обезвоживание (дегидратация) и просветление. Перед заливкой из кусочков удаляют воду, сначала помещая их последовательно в ступенчатую серию смеси этилового спирта (этанола) и воды (обычно с 70% до 100% этилового спирта).

Этанол затем замещают растворителем, который способен смешиваться с заливочной средой. При заливке в парафин в качестве такого растворителя обычно используют ксилол. По мере того, как ткани пропитываются растворителем, они обычно становятся прозрачными (просветление). После пропитывания кусочка ткани растворителем его помещают в термостат в расплавленный парафин, как правило, при температуре 58—60°С.

Под влиянием тепла растворитель испаряется, а пространства в тканях замещаются парафином. После извлечения из термостата ткань вместе с пропитывающим ее парафином затвердевает. Ткани, которые заливают в пластическую смолу, также обезвоживают в этаноле и, в зависимости от типа смолы, далее пропитывают растворителями пластмасс. Этанол или растворители впоследствии замещаются растворами пластиков, которые затвердевают посредством полимеризаторов, образующих перекрестные связи.

Микротом для получения срезов тканей, залитых в пластическую массу или парафин, используемых в световой микроскопии.
Вращение колеса привода перемещает держатель тканевого блока вверх и вниз. Каждый оборот привода выдвигает держатель блока на регулируемое расстояние (шаг), обычно от 1 до 10 мкм.
При каждом шаге тканевой блок проходит над кромкой ножа, который делает срезы.

Заливка в пластическую массу предотвращает сжатие, которое вызывают высокие температуры, необходимые для заливки в парафин, и дает значительно лучшие результаты.

Твердые блоки, содержащие ткани, помешаются в микротом; в результате резки стальной или стеклянной микротомной бритвой (ножом) получают срезы толщиной 1 — 10 мкм. Следует помнить, что 1 микрометр (1 мкм) = 0,001 мм = 10-6 м; 1 нанометр (1 нм) = 0,001 мкм = 10-6 мм = 10-9 м. Далее срезы помещают в воду и переносят на предметные стекла для окрашивания.

Можно использовать совершенно иной способ подготовки гистологических срезов путем быстрого замораживания тканей. В этом случае ткани фиксируют замораживанием (физически, а не химически), причем одновременно они становятся твердыми и поэтому могут подвергаться резке. Замораживающий микротом — криостат (греч. kryos — холод + statos — установка) — разработан для резки замороженных тканей.

Поскольку этот метод позволяет быстро приготовить окрашенные срезы (в течение нескольких минут), его обычно используют в больницах для исследования образцов тканей во время хирургических операций. Замораживание тканей также дает хороший эффект при проведении гистохимических исследований очень чувствительных ферментов или мелких молекул, так как замораживание не инактивирует большинство ферментов.

Из-за того, что обработка тканей такими растворителями, как ксилол, растворяет тканевые липиды, использование замороженных срезов рекомендуется при необходимости изучения этих соединений.

- Читать далее "Окрашивание тканей для микроскопии. Техника"

Оглавление темы "Методы исследования в гистологии":