Если желательно получение постоянных препаратов, то ткани следует зафиксировать. Чтобы избежать самопереваривания ткани присутствующими внутри клеток ферментами (аутолиз) или бактериями и сохранить ее структуру и молекулярный состав, кусочки органов следует быстро и правильно обработать до их удаления из тела животного или как можно быстрее после него.

Данное воздействие — фиксация — может выполняться химическими или (реже) физическими методами. При химической фиксации ткани обычно погружают в растворы веществ, известных как фиксаторы, которые обусловливают стабилизацию веществ или формирование перекрестных сшивок.

Поскольку для того, чтобы фиксатор полностью диффундировал в ткани, требуется определенное время, ткани до фиксации обычно разрезают на мелкие кусочки, что облегчает проникновение фиксатора и гарантирует сохранность ткани. Можно использовать внутривенное введение (перфузию) фиксатора. Так как фиксатор в этом случае быстро достигает тканей по кровеносным сосудам, фиксация существенно улучшается.

Одним из лучших фиксаторов для стандартной световой микроскопии является забуференный изотонический раствор 4% формальдегида. Химическая природа процесса, обусловливающего фиксацию, сложна и не полностью понятна. Установлено, что формальдегид и глютаральдегид — другой широко используемый фиксатор — реагируют с аминогруппами (NH2) тканевых белков.
В случае глютаральдегида его фиксирующее действие усиливается вследствие того, что он, как диальдегид, вызывает образование перекрестных сшивок в белках.

Ввиду высокого разрешения, которое обеспечивает электронный микроскоп, особое внимание при фиксации необходимо уделять сохранению ультраструктурных деталей. С этой целью применяют двойную фиксацию, которая стала стандартной процедурой подготовки тканей к ультраструктурным исследованиям.

Она основана на использовании забуференного раствора глютаральдегида, за которым следует вторая фиксация в забуференном растворе четырехокиси (тетроксида) осмия. Действие четырехокиси осмия связано с сохранением и окрашиванием липидов и белков.

- Читать далее "Заливка тканей для исследования. Блоки препаратов"

1. Что такое гистология? Задачи
2. Подготовка тканей к исследованию. Гистологические срезы
3. Фиксация тканей для исследования. Фиксаторы
4. Заливка тканей для исследования. Блоки препаратов
5. Окрашивание тканей для микроскопии. Техника
6. Световая микроскопия: методика, разрешающая способность
7. Фазово-контрастная микроскопия: методика, принципы
8. Поляризационная микроскопия: методика, принципы
9. Конфокальная микроскопия: методика, принципы
10. Флюоресцентная микроскопия: методика, принципы