Флюоресцентная микроскопия: методика, принципы

Флюоресцентная микроскопия: методика, принципы

При облучении некоторых веществ светом с определенной длиной волны они излучают свет с большей длиной волны. Это явление называется флюоресценцией. При флюоресцентной микроскопии срезы тканей облучают либо ультрафиолетовым (УФ) светом, либо лазером, а излучение находится в видимой части спектра.
Флюоресцирующие вещества выглядят как блестящие или окрашенные участки на темном фоне.

Флюоресцентные соединения, обладающие сродством к макромолекулам клеток, можно использовать в качестве флюоресцентных красителей. Примером может служить акридин оранж, который способен соединяться с ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислотой) и РНК.

При исследовании с помощью флюоресцентного микроскопа комплекс ДНК-акридин оранж излучает желтовато-зеленый свет, а комплекс РНК — акридин оранж — красновато-оранжевый свет. Таким образом можно идентифицировать и локализовать в клетках нуклеиновые кислоты.

Другая важная область использования флюоресцентной микроскопии основана на конъюгации флюоресцентных веществ (таких, как флюоресцеин изотиоцианат — ФИТЦ) с молекулами, которые специфически связываются с компонентами тканей и тем самым обеспечивают идентификацию этих компонентов под микроскопом.

Клетки почки в культуре, окрашенные акридин оранжем.
При использовании флюоресцентного микроскопа ДНК (внутри ядра) излучает желтый свет, а цитоплазма с высоким содержанием РНК имеет красноватый или оранжевый цвет.

Видео микроскопические методы исследования: световая, темнопольная, фазово-контрастная, люминесцентная и электронная микроскопии

- Вернуться в раздел "Гистология"

Оглавление темы "Методы исследования в гистологии":