Для быстрого скрининга опухолей часто используют проточную цитометрию и морфометрический анализ опухолевых клеток или ядер, выделенных из парафинизированных блоков тканей, основываясь на том, что индекс ДНК в клетках некоторых опухолей отличается от обычного. К сожалению, позволяя оценивать суммарное количество ДНК в достаточно большой популяции клеток, эти методы не дают никакой информации о специфических хромосомных нарушениях. Количественные и/или структурные хромосомные аномалии можно выявить кариотипированием опухолевых клеток.

Однако хромосомный анализ солидных опухолей с помощью обычных цитогенетических методов, как правило, проводят только после культивирования изолированных клеток, что не подходит для рутинных исследований. Кроме того, заключенный в парафин материал, полученный от онкологических больных с известным клиническим исходом, для такого цитогенетического анализа непригоден.

Для выявления количественных хромосомных аномалий в интерфазном ядре можно использовать так называемый метод интерфазной цитогенетики — гибридизацию in situ хромосомо-специфичных зондов с интерфазными ядрами. Здесь мы попытаемся дать критический анализ методов ГНС, которые можно использовать для анализа суспензий изолированных клеток солидных опухолей, а также парафиновых и криостатных срезов. Мы очертим область применения этих методов и рассмотрим предварительные данные по их применению для идентификации опухолей.

Для рутинного обнаружения патологий можно использовать разбавленные суспензии изолированных клеток солидных опухолей, линии опухолевых клеток, отпечатки, цитологические препараты, парафиновые и криостатные срезы солидных опухолей. В общем случае процедура ГИС состоит в следующем.

а. Выбор зонда.
б. Его мечение для проведения неизотопной гибридизации.
в. Фиксация материала, приготовление препаратов, предварительная обработка.
г. Гибридизация зонда с денатурированной ДНК-мишенью и отмывание препаратов после гибридизации.
д. Иммуноцитохимическая детекция, интерпретация результатов.

Для обнаружения количественных и структурных хромосомных аберраций в опухолевых клетках можно использовать несколько типов ДНК-зондов. Обычно это ДНК, которые гибридизуются с высокоповторяюшимися сегментами хромосом в основном из центромерных и теломерных районов: сателлитная или альфоидная ДНК. Последовательности-мишени для этих зондов представлены копиями от сотен до тысяч, т. е. содержат до нескольких тысяч т.п.н., локализованных в компактных околоцентромерных районах хромосом. Так, зонд, специфичный для хромосомы 1, гибридизуется с тандемным повтором длиной 1,77 т.п.н., находящимся в околоцентромерном районе (lql2).

Зонды, специфичные в отношении высокоповторяющихся сегментов ДНК имеются в продаже. Поскольку в интерфазных ядрах около-центромерные районы хромосом выглядят как отдельные зоны гибридизации, число которых в S-фазе остается постоянным, эти зонды можно использовать для проведения относительно простой, дающей воспроизводимые результаты неизотопной гибридизации in situ. В протоколе приведен состав гибридизационной смеси, позволяющий уменьшить неспецифическую гибридизацию. Если гибридизацию в присутствии 60% формамида и последующее отмывание проводить в жестких условиях, то высокоповторяющиеся последовательности будут гибридизоваться преимущественно со специфическими хромосомами.

- Вернуться в оглавление раздела "Генетика."