Анализы при дерматофитиях - методы выявления дерматофитов

Клинический диагноз дерматофитной инфекции подтверждается обнаружением элементов гриба при микроскопии, идентификацией патогена в культуральном анализе или появлением гиф в роговом слое при гистологическом исследовании. Кроме того, характер свечения при обследовании под лампой Вуда может подтвердить клиническое подозрение.

Анализы при дерматофитиях

а) Микроскопия. Хотя исследование под микроскопом обработанных КОН образцов чешуек не позволяет определить видовую принадлежность гриба или охарактеризовать профиль восприимчивости, это метод применяется (или недостаточно применяется) как быстрый, недорогой и доступный инструмент для подтверждения диагноза дерматофитии.

При дерматофитии, поражающей кожу, волосы или ногти, микроскопия препарата с 10-20% КОН без исключений показывает септированные и ветвящиеся гифы. Все поверхностные дерматофиты при визуализации данным методом кажутся идентичными. Поскольку исследование с КОН может дать ложноотрицательный результат в 15% случаев, при подозрении на дерматофитию пациентам следует проводить терапию исходя из клинической картины. Подтверждение инфекции в культуральном анализе рекомендуется, когда требуется системная терапия, как например, в случае дерматофитии волосистой части кожи головы.

Чешуйки кожи получают, соскабливая их с пораженного участка тупым концом скальпеля кнаружи от прогрессирующих краев очага. Обрезки ногтей на полную их толщину выполняют, отступив от края, они должны включать как можно более проксимальный дистрофический участок, но так, чтобы не нанести травмы. Волосы следует выдернуть (не обрезать), поместить на предметное стекло, приготовить препарат с 10-20% КОН и накрыть покрывным стеклом. Легкий подогрев предметного стекла на слабом пламени помогает раствору КОН лучше проникнуть в кератин. Микроскопия с малым увеличением выявит три возможных типа инфекции:
(1) Эктотрикс—небольшие или крупные артроконидии, образующие «футляр» вокруг волосяного стержня,
(2) Эндотрикс — артроконидии внутри волосяного стержня или
(3) Фавус — гифы и воздушные пространства внутри волосяного стержня.

Дерматофиты под микроскопом
При микроскопии чешуек коже обнаруживаются септированные ветвящиеся гифы.

б) Культура. Определение вида поверхностных грибов опирается на микроскопические, макроскопические и метаболические характеристики организма. В то время как некоторые дерматофиты легко идентифицируются на основании первично изолированных культур, для большинства остальных требуется дальнейшая дифференцировка методом субкультур на специальных средах (идентификационная культура) или посредством специальных биохимических тестов. Декстрозный агар Сабуро (SDA) наиболее часто применяется в качестве среды для выделения дерматофитов и является той средой, на которой основано большинство морфологических описаний. Элиминацию контаминантов культуры, плесеней, дрожжей и бактерий, осуществляют, добавляя в среду циклогексимид и хлорампеникол (+/-гентамицин), что делает ее высокоизбирательной для изоляции дерматофитов.

Развитие колоний может занять 5-7 дней в случае Epidermophyton floccosum и до 4 недель для Trichophyton verrucosum. Культуры инкубируют при комнатной температуре (20-25 °С) как минимум 4 недели, прежде чем сделать вывод об отсутствии роста. Дерматофитная тестовая среда (DTM) является альтернативной средой для изоляции дерматофитов, которая содержит феноловый красный индикатор pH. Среда становится красной, когда протеолитическая активность дерматофитов повышает pH до 8 и выше, и остается янтарной при росте большинства сапрофитов. Побочные кислотные продукты недерматофитных грибов окрашивают среду в желтый цвет. Хотя DTM является хорошей альтернативой для изоляции дерматофитов, прямая идентификация дерматофитов не всегда возможна вследствие изменений в росте и, следовательно, в морфологии дерматофитов в DTM.

В таблице ниже описаны общие микроскопические признаки микроконидий и макроконидий трех родов дерматофитов, а в следующей таблице представлены колонии и микроскопические признаки самых распространенных видов дерматофитов. Идентификация изолированных грибов облегчается субкультуральным анализом на специфических средах, таких как картофельный декстрозный агар (PDA) или кукурузный агар Борелли (BLA), которые стимулируют спорообразование, производство пигмента и развитие типичной морфологии. И наконец, дерматофиты могут далее дифференцироваться по способности расти на полированном рисе, перфорировать короткие пряди волос in vitro, гидролизовать мочевину (уреазный тест) или по потребности в питательных средах для роста.

Дерматофития волос - эктотрикс и эндотрикс
Схема поверхностного (эктотрикс) и внутреннего (эндотрикс) поражения волосяного стержня.

в) Патогистология дерматофитий. Биопсия кожи редко применяется при обследования в случае типичных дерматофитий. При локализованных кожных высыпаний с подозрением на дерматофитию и неоднозначным результатом исследования с КОН терапия часто проводится, несмотря на отсутствие подтверждения. Биопсия может подтвердить диагноз, когда для лечения стойких или распространенных высыпаний рекомендуется системный препарат. Биопсия может помочь в диагностике гранулемы Майокки, при которой исследование с КОН поверхностных чешуек чаще дает отрицательный результат. Кроме того, биопсия иногда полезна для подтверждения наличия гиф, поражающих волосяные стержни при дерматофитии волосистой части кожи головы, хотя для определения вида патогена необходим культуральный анализ.

При наличии гиф в роговом слое их можно оценить путем окрашивания гематоксилином и эозином. Однако специальные красители, чаще всего перйодная кислота и реактив Шиффа (PAS) или метенамин-серебро, выявляют гифы, плохо определяемые при рутинном окрашивании. Если для онихомикоза наиболее чувствительным тестом является культуральный, то для исследования обрезков ногтя наиболее чувствителен PAS-метод, который избавляет от необходимости неделями ждать результата.

Признаки поражения дерматофитами
Свойства дерматофитов
Свойства дерматофитов

г) Флуоресценция под лампой Вуда. Исследование под лампой Вуда (365 мм) участков тела с волосяным покровом, таких как волосистая часть кожи головы или область бороды, может выявить птерединовую флуоресценцию волос, инфицированных грибковыми патогенами. Флуоресцирующие волосы затем подвергают дальнейшему исследованию, в том числе культуральному анализу. Эктотриксные организмы, такие как М. cams и М. audouinii будут флуоресцировать при исследовании под лампой Вуда, а эндотриксный организм Т. tonsurans флуоресценции не вызывает.

Поскольку Т. tonsurans является сейчас самым распространенным возбудителем дерматофитии волосистой части головы, это ограничивает применение лампы Вуда в целях обследования пациента. В таблице ниже перечислены основные типы поражения волос дерматофитами и виды флуоресценции.

Питательная среда для дерматофитов Trichophyton
Типы инфекций волос вызванные дерматофитами

- Рекомендуем далее ознакомиться со статьей "Дерматофития волосистой части кожи головы (Tinea capitis)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 16.4.2019

Ваши замечания и вопросы: