Следовательно, альтернативой трансплантации аллогенных стволовых клеток является терапевтическое клонирование, основанное на пересадке ядер соматических клеток в энуклеированную яйцеклетку для создания бластоцисты, из внутренней клеточной массы которой затем выделяются линии генетически идентичных донору соматического ядра ЭСК.

Технически эта идея вполне осуществима, поскольку возможность создания линий стволовых клеток из бластоцист, полученных после трансплантации соматических ядер в энуклеированные яйцеклетки, неоднократно доказана в экспериментах на лабораторных животных (Nagy, 1990; Munsie, 2000). В частности у мышей, гомозиготных по мутации гена rag2, фибробласты, полученные при культивировании клеток субэпидермальной ткани, использовались в качестве доноров ядер, которые трансплантировали в энуклеированные ооциты.

После активации ооцитов "зиготу" культивировали до образования бластоцисты, из внутренней клеточной массы которой изолировали ЭСК и переводили их в линию нуллизиготных по мутантному гену клеток (rag2). Методом гомологичной рекомбинации в таких ЭСК корригировали мутацию одного аллельного гена. В первой серии экспериментов из ЭСК с рекомбинантным восстановленным геном получали эмбриоидные тельца, трансфицировали их клетки рекомбинантным ретровирусом (HoxB4i/GFP) и после размножения вводили в вену мышей rag2.

Во второй серии тетраплоидные бластомеры агрегировали с генетически модифицированными стволовыми клетками и трансплантировали их самкам-реципиентам. Родившиеся иммунокомпетентные мыши служили донорами костного мозга для трансплантации мутантным мышам rag2. В обеих сериях результат был положительным: через 3-4 недели у всех мышей были обнаружены зрелые нормальные миелоидные и лимфоидные клетки, способные продуцировать иммуноглобулины.

Таким образом, пересадку в ооцит ядер соматических клеток можно использовать не только для получения линий ЭСК, но и для цитогенотерапии — коррекции наследственных аномалий, применяя ЭСК в качестве вектора для транспорта корригирующей генетической информации.

Но и в этом направлении клеточной трансплантации, кроме биоэтических проблем, имеются свои ограничения. Не ясно, насколько безопасной окажется трансплантация терапевтически клонированных клеток с генотипом, идентичным генотипу конкретного больного, поскольку такие клетки могут привносить мутации, создающие предрасположенность к иным заболеваниям. Нормальные яйцеклетки человека остаются труднодоступным объектом, тогда как даже при пересадке соматических ядер в энуклеированные яйцеклетки животных только 15-25% сконструированных "зигот" развивается до стадии бластоцисты (Yanagimachi, 2002).

При этом не определено, какое количество бластоцист потребуется для получения одной линии плюрипотентных клонированных ЭСК. Следует отметить и высокий уровень финансовых затрат, связанных со сложностью методологии терапевтического клонирования.

- Читать далее "Размножение стволовых клеток. Регенеративно-пластические технологии и биоэтические вопросы"