Лабораторная диагностика вирусных инфекций человека и животных основана на: 1) прямых микроскопических методах обнаружения вирионов в патологических материалах; 2) выделении из них чистых культур вирусов с последующей идентификацией; 3) определении вирусоспецифических антител в сыворотке крови больных и вирусоносителей. При этом материалы исследуются с помощью иммерсионного люминесцентного и электронного микроскопов; культуры вирусов выделяют, инфицируя материалами клетки куриные эмбрионы и животных; идентификацию вирусов и определение вирусоспецифических антител осуществляют, используя иммунологические (серологические) реакции.

Патологические материалы и их обработка. Материалами, в которых содержатся вирусы, могут являться: кал, моча, мокрота, носоглоточные смывы, содержимое высыпаний на коже и слизистых оболочках и прочие экскреты; кровь, спинномозговая жидкость, пунктаты (лат. punctum - прокалывать) плевральной и брюшной полости, коленного сустава, увеличенных лимфоузлов и другие секреты. От умерших людей и погибших животных берут пораженные вирусами органы и ткани. Взятые для исследования материалы при необходимости подвергаются специальной обработке для приготовления мазков и гистологических препаратов, а при инфицировании культур клеток, эмбрионов и животных измельчаются, отстаиваются, фильтруются, осветляются, обрабатываются антибиотиками для уничтожения посторонней (банальной) микрофлоры, в большом количестве находящейся в экскретах.
Используются два микроскопических способа выявления вирусов в материалах: вирусоскопия в иммерсионном и люминесцентном микроскопах и электронная микроскопия.

Вирусоскопия. В иммерсионном световом микроскопе обнаруживаются самые крупные элементарные тельца. Так, при натуральной оспе в жидкости кожных пузырьков находят вирионы Пашена, а в таких же везикулах при ветряной оспе - вирионы Арагана.

Легче при вирусных инфекциях выявить внутриклеточные включения. В основном они представлены скоплениями вирионов вперемешку с реактивными клеточными продуктами и в зависимости от места репликации вирионов находятся в цитоплазме или ядре клеток-хозяев. В частности, цитоплазматическими включениями являются тельца Гуарниери в эпителиальных клетках, скопления реовирусов и вирусов гриппа в них, тельца Бабеша-Негри - в нейроцитах, а ядерными -адено-, папова- и герпесви-русные, правда, состоящие из клеточного материала. Изредка в одной и той же клетке вирусы, например коревой, формируют цитоплазматические и ядерные включения.

По форме, размерам, структуре, отношению к красителям вирусные включения строго специфичны. Например, тельца Гуарниери имеют округлую, серповидную или амебоидную форму диаметром 1-10 мкм, тельца Бабеша-Негри -овальные или эллипсоидные, достигающие 20 мкм, включения реовирусов серповидные, наполовину охватывающие клеточное ядро, коревые включения - в виде почкующихся мелких дрожжей.

При этом для обнаружения телец Пашена и Арагана мазки подвергают «серебрению» по методу Морозова или обрабатывают вирус нейтрализующим и антителами, мечеными флюорохромами.

Перед «серебрением» загодя готовят три раствора: N 1 - уксусно-формалиновый фиксатор (100 мл дистиллированной воды + + 1 мл ледяной уксусной кислоты + 2 мл 40%-го формалина); N 2 - танин-феноловая протрава (10 мл той же воды + 5 г танина + + 1 мл жидкого фенола); N 3 - адсорбент (свежеприготовленный 5%-й раствор нитрата серебра с добавлением нескольких капель аммиака, вызывающих легкую опалесценцию). «Серебрение» мазков выполняется в три этапа с промыванием после каждого из них водопроводной водой: мазки фиксируются раствором N 1 в течение 1 мин; протравливаются раствором N 2 с подогревом до обхождения паров; «серебрятся» раствором N 3 с подогревом до появления темно-коричневого цвета. В высушенных мазках под иммерсионным микроскопом обнаруживают грозди кокковидных вирионов коричнево-черного цвета.

В препаратах, обработанных мечеными антителами под люминесцентным микроскопом обнаруживают вне- и внутриклеточно расположенные вирионы в виде разноцветных точек и конгломератов в зависимости от природы используемого флюорохрома.
Вирусные внутриклеточные включения окрашивают по Туревичу, Муромцеву и Гимзе-Романовскому.

- Вернуться в оглавление сайта "Медицинский сайт MedicalPlanet"