Основные принципы иммуногистохимии. Иммунофлуоресцентная (или иммунолюминесцентная) микроскопия

Основные принципы иммуногистохимии. Иммунофлуоресцентная (или иммунолюминесцентная) микроскопия

Говоря об основных принципах иммуногистохимии, следует подчеркнуть, что она позволяет идентифицировать in situ антигенные субстанции клеток или тканей на основе специфического взаимодействия антигена и антитела, которое выявляется с помощью соответствующей метки на светооптическом или ультраструктурном уровне.

Кроме чисто иммунологических подходов, зависящих исключительно от специфического взаимодействия антител или антигенов с тканесвязанными антигенами (или антителами), может быть также успешно использована неиммунологическая фиксация субстанций в комбинации с иммунологическими методиками (так называемый смешанный метод) или с неиммунологическим связыванием [Bosnian, 1983; Van Noorden, Polak, 1983; и др.].

В качестве маркеров, с помощью которых выявляют указанные реакции связывания, используют флуоресцентные красители (иммунофлуоресценция), энзимы (иммуноэнзиматические методики), электронно-плотные субстанции и частицы для светооптической и ультраструктурной иммуноцитохимии (с коллоидальным золотом, ферритином), а также другие частицы.

Иммунофлуоресцентная (или иммунолюминесцентная) микроскопия, как уже отмечалось, в качестве маркерного метода впервые предложена А. Н. Coons с соавторами. Она основана на мечении антитела флуоресцентным красителем — флуорохромом. Используют чаще такие флуорохромы, как флуоресцеин-изотиоцианат, тетраметил-родамин-изотиоцианат, лизамин-родамин В-200 сульфонил-хлорид, техасский красный сульфонил-хлорид.

При прямом методе антитела, меченные флуорохромом, взаимодействуют с антигеном, связанным с тканью, и маркируют его. При непрямом методе „вторичные" антитела, меченные флуорохромом, маркируют локализацию „первичных" антител, уже связанных с тканевым антигеном и как бы выполняющих роль посредников. Используются оптимальные соотношения флуорохромов к тканевым белкам для получения небольшого излучения, которое обычно дает специфическое окрашивание искомых субстанций и которое можно всегда отличать от неспецифического фонового окрашивания.
Поскольку соединение антитела с маркером идет через химическую реакцию, последняя в известной мере может повредить структуру антитела и нарушить или извратить иммунологическую реакцию.

К числу отрицательных сторон иммунофлуоресцентной микроскопии относится непостоянство окраски искомого субстрата в тканях. Правда, сейчас этот недостаток можно преодолеть, поместив замороженный срез, окрашенный флуорохромом, в специальную заливочную, среду, например, в мовиол. Другими недостатками являются необходимость в специальном и дорогостоящем оборудовании (флуоресцентный микроскоп, криостат), а также трудности распознавания и изучения тйнких структур в ткани замороженного среза, которые не окрашиваются флуорохромами и остаются в „темном поле".
Окраска параллельных срезов или докраска исследуемых замороженных срезов обычными гистологическими красителями может выручить, но не всегда.

Попытки преодолеть указанные выше недостатки привели к широкому использованию энзимов в качестве маркеров. В настоящее время применяют пероксидазу хрена, щелочную фосфатазу, глюкозил-оксидазу, бета-галактозидазу, которые через гистохимические реакции с различными хромогенами могут выявлять в тканях всевозможные окрашенные конечные продукты [Cordell et al., 1984].

- Читать далее "Пероксидазно-антипероксидазная (ПАП) методика. Реакции с гликозил-оксидазой при опухолях"

Оглавление темы "Иммуногистохимия опухоли":