Онкофетальные антигены. Канцеро-эмбриональный антиген

Онкофетальные антигены. Канцеро-эмбриональный антиген

Онкофетальные антигены представляют собой субстанции, которые образуются в норме, в ходе развития плода или при возникновении опухоли в детском и взрослом организме. Из них наиболее изучены канцеро-эмбриональный антиген (КЭА) и альфа-фетопротеин (АФП). Исследование этих антигенов в онкологии и онкоморфологии стало нынче чуть ли не банальным делом, а в свое время послужило толчком для дальнейшего развития учения об опухолевых маркерах. Менее известен и реже используется антиген эпителиальных мембран (АЭМ или ЭМА), о котором мы здесь говорить не будем.

КЭА отличается тремя свойствами: необычно высокой степенью гетерогенности размера молекул, что объясняется тем или иным содержанием карбогидратов; принадлежностью к семейству тесно связанных гликопротеинов, широко распространенных в тканях организма; необычно сильной иммуногенностью. Это делает его трудноопределимым в изолированном виде с помощью аналитических методик. Поскольку гены, обеспечивающие экспрессию КЭА, пока что не клонированы и их последовательности не изучены, для выявления КЭА требуется комбинированный подход, в частности, включающий иммунологические методики с применением поли- и моноклональных антител.

Первоначальной процедурой для получения КЭА является обычно экстракция ткани метастатических очагов аденокарциномы толстой кишки в печени с помощью перхлорной кислоты. Дальнейшие ступени очистки полученного экстракта включают ионно-обменную хроматографию, фильтрацию геля, хроматографию свойств кон-А-сефарозы, отделение иммуносорбента.

Чистота продукта должна контролироваться в преципитатах проб КЭА, меченных изотопами, с помощью поли- и моноклональных анти-КЭА антител. Антиген, полученный при такой методической последовательности, представляет собой крупномолекулярный гликопротеин с бета-электрофорсзной подвижностью и молекулярным весом примерно 180 000 дальтон. Этот антиген, т. е. КЭА, состоит из одной цепи полипептида в 829 остатков и примерно 40 N-ацетилглюкозамин-аспарагин-связующих олигосахаридных цепей. И хотя в пептидной цепи определены только N-терминальная последовательность интактной молекулы и несколько трипсинных фрагментов, предполагается, что состав пептидной цепи постоянен.

В противоположность этому карбогидратная часть, содержащая около 60 % молекул, обнаруживает заметную микрогетерогенность. Карбогид-ратные цепи, имеющие преимущественно 4-валентный тип, несут множество терминальных остатков сиаловых кислот и фукоз. Кроме того, некоторые молекулы КЭА могут нести специфичность антигенов групп крови в своих карбогидратных частях цепей, особенно — группового предшественника Н-антигена.

И сам КЭА, и другие представители этого антигенного семейства обладают высокой иммуногенностью во всех видах, обычно используемых для иммунизации. Большинство поликлональных антисывороток, повышаемых в концентрации против КЭА, реагируют с антигенными детерминантами самого антигена и всеми связанными с ним субстанциями: неспецифическим перекрестным антигеном (NCA), фекальными и мекониевыми антигенами (NFA, МА,МА-100), колоректальными (CRA), тумор-экстрактными (ТЕХ) и другими (BGP, NCA, NGP, CEX, CCEA, NFA) антигенами.

Схожее распределение реактивности отмечено и для многих моноклональных антител. Это объясняет, что КЭА-связанные субстанции имеют несколько эпитопов (участков молекул, соединяющихся с антителом), общих с КЭА, и что специфичность моноклональных антител для этого антигена может быть определена только при исчерпывающем исследовании всех потенциально перекрестно реагирующих антигенов.

В 1982 г. было произведено 8 моноклональных антител, распознающих шесть детерминант в нативном КЭА, причем два эпитопа встречались дважды в антигене. Два антитела также реагировали с NCA. Четыре года спустя при использовании набора в 18 моноклональных антител A. Haggerty с соавторами определили 9 эпитопов и рассмотрели только реакцию с интактными молекулами. Лишь с учетом данных о связывании с NCA, денатурированным КЭА и его фрагментами были найдены 12 эпитопов. Семь связующих сайтов обнаружили специфичность к КЭА. Поскольку не все моноклональные антитела распознавали эпитопы в нативном КЭА, предполагалось, что некоторые эпитопы могут иметь также карбогидратную природу.
Аутоантитела против КЭА были найдены в сыворотке крови многих раковых больных. Они обнаружили также реактивность к антигену в гистологических срезах.

- Читать далее "Альфа-фетопротеин (АФП). Иммуногистохимические маркеры дифференцировки опухоли"

Оглавление темы "Иммуногистохимия опухоли":