Перидиплоидные стволовые линии опухоли. Тест ядрышковых организаторов опухолевых клеток

Перидиплоидные стволовые линии опухоли. Тест ядрышковых организаторов опухолевых клеток

Общий термин "перидиплоидные стволовые линии" смог обеспечить большую сопоставимость результатов, полученных на разных аппаратах, дававших индекс ДНК, который не может отклоняться от диплоидного стандарта более, чем на 10 % (0,9 < иДНК перидиплоид < 1,1).

Это выглядит логичным, поскольку при очень высоком разрешении возможен риск неправильного истолкования минимальных отклонений индекса ДНК между, например, двумя нормальными линиями на основании якобы имеющихся отклонений в окраске ядер. Поскольку все злокачественные опухоли содержат ядра с количественными или структурными аберрациями хромосом, цитофотометрический анализ содержания ДНК имеет смысл лишь при наличии стволовых линий с минимальными (перидиплоидными) и выраженными (анэуплоидными) отклонениями от нормального содержания ДНК. Тем не менее, высокие разрешения аппаратов проточной цитометрии являются предпосылкой, обеспечивающей точный анализ клеточного цикла и идентификацию побочных клеточных линий.

Косвенно судить об интенсивности пролиферации ткани и, в какой-то мере, об ее энергетическом балансе позволяет тест ядрышковых организаторов. Анализ активности (аргентофилии) районов ядрышковых организаторов (РЯО, NOR, или AgNOR) с помощью одноэтапной окраски азотнокислым серебром приобрел в последние годы огромную популярность [Anichkov et al., 1987].

Известно, что ядрышко, наблюдающееся только в интерфазном ядре клетки, не является каким-то отдельным внутриядерным органоидом, а представляет собой особым образом объединенные зоны вторичных перетяжек пяти акррцентрических хромосом: №№ 13, 14, 15, 21 и 22. Район объединения этих зон и получил название РЯО. В нем расположены повторяющиеся последовательности ДНК, связанные с гистоновыми и негистоновыми белками и названные рибосомальными генами. Такое название они получили потому, что продуктом их транскрипции является прерибосомальная 45s РНК, формирующая фибриллярный центр ядрышка (S — коэффициент седиментации в единицах Сведберга). При созревании 45s РНК образуются рибосомальные 28s, 18s, 5,8s РНК, формирующие гранулярный компонент ядрышка [Збарский, 1988 ].

Рибосомальные РНК в свою очередь являются основой для формирования рибосом — внутриклеточных органоидов, на которых в клетках происходит синтез аминокислот и белков. Формирование и степень активности РЯО, а следовательно, активности рибосомальных генов контролируется многочисленными генами-регуляторами и зависит в конечном счете от потребностей клетки в биосинтезе белков, аминокислот и поддержания энергетического баланса.

При организации и созревании целого ядрышка в пролиферирующих клетках происходит серия изменений, получившая название ядрышкового цикла. Понятно, что последний тесно связан с клеточным циклом, о котором мы много говорили выше. Начинается ядрышковый цикл в поздней телофазе с появления в РЯО так называемого пренуклеолярного материала. Наиболее интенсивное созревание и повышение активности РЯО происходит в период от телофазы до середины митотоксического цикла, т. е. до окончания редупликации хромосом. Считается, что именно активное созревание ядрышка и повышение активности РЯО указывает на „решение" клетки вступить в митоз или, другими словами, отражает ее пролиферативные потенции.

Для определения активности РЯО используют аргирофильную реакцию, сущность которой состоит в осаждении гранул серебра на карбоксильных группах негистоновых белков, связанных с рибосомальными генами. Биохимическая природа указанных белков еще не уточнена. Считается, что они состоят из крупных субъединиц РНК-полимеразы-1 или являются фракциями С-23 и В-23 ядрышковых белков. Высокая специфичность аргирофильных реакций в РЯО доказана. В частности, установлено, что гранулы соли серебра оседают на фибриллярном компоненте ядрышка, т. е. там, где локализуется первичный продукт транскрипции рибосомальных генов — гигантская молекула-предшественник 45s РНК. Что касается методики постановки реакции на активность РЯО, то она неоднократно опубликована [Плотникова, 1988; Антонова, 1990].

- Читать далее "Онкофетальные антигены. Канцеро-эмбриональный антиген"

Оглавление темы "Иммуногистохимия опухоли":