Авторадиография срезов тканей: методика, принципы

Авторадиография представляет собой исследование биологических явлений на срезах тканей с использованием радиоактивности. Авторадиография позволяет обнаружить радиоактивные вещества в тканях благодаря воздействию радиоактивного излучения на фотоэмульсию.

Кристаллы бромистого серебра, содержащиеся в эмульсии, служат микродетекторами радиоактивности, точно так же, как они реагируют на свет в обычной фотографии. Первый этап авторадиографии состоит во введении радиоактивного соединения в клетки.

В зависимости от цели исследования, можно использовать разнообразные молекулы, включая радиоактивные аминокислоты, радиоактивные нук-леотиды и радиоактивные углеводы. Эти молекулы называются предшественниками, потому что они могут использоваться клетками для синтеза более крупных молекул, таких, как белки, нуклеиновые кислоты или полисахариды и гликопротеины.

Получают срезы тканей и покрывают их фотоэмульсией. Препараты хранят в светонепроницаемых коробках; после определенного периода экспозиции их проявляют фотографическим способом и изучают. Когда радиоактивные частицы попадают в кристаллы бромистого серебра, содержащиеся в фотоэмульсии, они превращаются в мелкие черные зерна металлического серебра, тем самым обнаруживая присутствие радиоактивного соединения в ткани.

авторадиография срезов тканей
Авторадиографы поднижнечелюстной железы мыши после введения 3 I-фукозы за 8 ч до получения материала.
А — при использовании светового микроскопа можно видеть черные зерна серебра, указывающие участки клетки, содержащие радиоактивные вещества. Большая часть радиоактивного материала находится в гранулах клеток гранулярных протоков железы. Большое увеличение.
авторадиография срезов тканей
Авторадиографы поднижнечелюстной железы мыши после введения 3 I-фукозы за 8 ч до получения материала.
Б — та же ткань, подготовленная методом электронно-микроскопической авторадиографии. Зерна серебра при этом увеличении выглядят как извитые структуры, расположенные главным образом над гранулами (Г) и в просвете железы (П). Большое увеличение.
авторадиография срезов тканей
Авторадиографы срезов ткани мыши, которой за 1 ч до получения органов ввели 3Н-тимидин.
Так как авторадиографы экспонировали в течение очень продолжительного времени, радиоактивные ядра содержат большое количество метки и покрыты «облаками» темных зерен.
А — в основании кишечных желез (треугольники) многие клетки делятся, но вдоль ворсинок (стрелка) делящиеся клетки отсутствуют. Малое увеличение.
Б — на срезе лимфатического узла видно, что деление клеток происходит преимущественно в его герминативных центрах (стрелка). Малое увеличение.

Структуры, содержащие радиоактивные молекулы, покрыты такими зернами. Этот метод можно использовать как в световой, так и в электронной микроскопии.

Обнаружение радиоактивных соединений в определенных тканевых компонентах позволяет получить обширную информацию. Так, при использовании радиоактивных аминокислот можно установить, какие клетки в данной ткани вырабатывают больше белка, а какие — меньше, поскольку количество зерен серебра, образовавшихся над клетками, пропорционально интенсивности синтеза белка.

С помощью радиоактивного предшественника ДНК (такого, как радиоактивный тимидин) можно определить, какие клетки в данной ткани (и в каком количестве) готовятся к делению. Можно анализировать также и динамические процессы.

Например, для того, чтобы выяснить, где в клетке вырабатывается белок, если он далее секретируется, а также по какому пути он перемещается внутри клетки, прежде чем он будет из нее выделяться, нескольким животным вводят радиоактивную аминокислоту и получают от них материал спустя различные промежутки времени после введения. Авторадиографы срезов материала, полученного в разные сроки эксперимента, выявят миграцию радиоактивных белков.

Для того чтобы установить, где в органе образуются новые клетки и куда они мигрируют, нескольким животным вводят радиоактивный тимидин и получают материал спустя различное время после инъекции. Авторадиографы срезов покажут, где клетки делятся и куда (если это происходит) они мигрируют.

- Читать далее "Культура клеток и тканей. Применение"

Оглавление темы "Методы гистологии":
  1. Трансмиссионная электронная микроскопия: методика, принципы
  2. Сканирующая электронная микроскопия: методика, принципы
  3. Авторадиография срезов тканей: методика, принципы
  4. Культура клеток и тканей. Применение
  5. Фракционирование клеток. Гистохимия, цитохимия
  6. Полисахариды, олигосахариды и липиды клеток и тканей
  7. Иммуноцитохимия: поликлональные и моноклональные антитела
  8. Метод гибридизации в иммуноцитохимии: методика, принципы
  9. Трудности исследования срезов тканей. Причины проблем
  10. Разновидности клеток организма. Классификация

Ваши замечания и вопросы: