Перед забором яйцеклетки необходимо подготовить лабораторию, чтобы обеспечить оптимальные условия для быстрого, эффективного и безопасного забора ооцита и помещения его в инкубатор. Правильная подготовка сводит к минимуму воздействие окружающей среды на ооцит вне инкубатора.

Условия в палате перед забором яйцеклетки. Перед забором яйцеклетки важно удостовериться, что условия в лаборатории стабильны. Все поверхности должны быть чистыми, температура нагревательных блоков должна составлять 37 °С, то есть совпадать с температурой катетеров, используемых для извлечения фолликулярной жидкости. Рекомендуют перед применением прополоскать все пипетки и сосуды в культуральной среде.

Среды для яйцеклеток. Рекомендуют готовить обрабатывающую и культуральную среды за день до забора яйцеклетки. Сосуды для культуральной среды следует готовить и хранить в инкубаторе с углекислым газом накануне процедуры. Обрабатывающую среду перед использованием необходимо нагревать на водяной бане или в сухом инкубаторе. При выполнении процедур вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) следует поддерживать температуру среды 37 °С.

Забор ооцита. Необходимо подготовить пробирки, содержащие обрабатывающую среду и препарат гепарина для предотвращения коагуляции. Не нарушая стерильности, их помещают в нагревательный блок в палате, где будет производиться забор. Извлеченную фолликулярную жидкость помещают в обрабатывающую среду при температуре 37 °С, содержащую белок, а затем сразу же доставляют в лабораторию.

В лаборатории проводят экспресс-анализ пунктата на наличие ооцит-кумулюсных комплексов. После обнаружения ооцита его ополаскивают обрабатывающей средой, быстро градуируют и помещают в предварительно уравновешенный сосуд с культуральной средой в инкубаторе с углекислым газом. Все это нужно делать быстро. В том случае, если лаборатория расположена далеко от палаты, где проводят забор ооцита, следует использовать передвижное оборудование и проводить поиск яйцеклетки в палате, где осуществляли ее забор, а также использовать такое оборудование для транспортировки ооцитов в лабораторию. Обычно в этих целях используют транспортный ламинал, оборудованный микроскопом.

Оценка состояния ооцита

Ооцит-кумулюсные комплексы подсчитывают перед инкубацией. Точное определение степени зрелости ооцитов на момент забора помогает при расчете времени оплодотворения, а также вероятности успеха; кроме того, могут быть выявлены какие-либо отклонения. Первичная оценка ооцита основана на непосредственном визуальном анализе морфологии ооцит-кумулюсного комплекса. Оценка основана на характеристиках кумулюса и corona radiata. Первый осмотр следует проводить быстро, во время поиска ооцита в фолликулярной жидкости. При ЭКО с традиционной инсеминацией яйценосный холмик не удаляют перед оплодотворением, таким образом, возможности наблюдения ограничены.

Незрелые ооциты определяют как находящиеся в стадии мейоза, предшествующей метафазе второго деления мейоза. В их число входят ооциты в профазе I деления мейоза, определяемые по наличию зародышевого пузырька или ядерной оболочки в цитоплазме и отсутствию направительного тельца в перивителлиновом пространстве. Если кумулюс и corona radiata присутствуют, обычно они сильно уплотнены. При продолжении профазы I ооцит вступает в метафазу первого деления мейоза. Эта промежуточная стадия зрелости определяется исчезновением зародышевого пузырька и отсутствием первого полярного тельца. В ооцитах в стадии I деления мейоза яйценосный холмик может быть увеличен, но corona radiata все еще находится в сжатом виде.

Экструзия первого полярного тельца обозначает переход ооцита к зрелости, т.е. к стадии II деления меиоза. Ооциты в этой стадии мейоза обычно обладают полностью развитым кумулюсом. В норме ооцит остается в стадии II мейоза до оплодотворения, когда второе деление мейоза продолжается, происходит экструзия второго направительного тельца, формируются мужской и женский пронуклеусы.

Гистологическое исследование ооцита после удаления кумулюса позволяет оценить его морфологически. Следует учитывать внешний вид цитоплазмы, вителлинового слоя, полярного тельца. Гомогенная цитоплазма с однородным цветом и гранулярностью, занимающая большую часть пространства внутри вителлинового слоя, свидетельствует о хорошем качестве ооцита. Вакуоли, темную окраску, сжатую форму или гранулярность расценивают при анализе морфологического качества ооцита как негативные признаки. Рассмотрение формы и толщины вителлинового слоя может оказаться важным; в стадии развития не должно быть трещин, и толщина его должна быть соответствующей.

Существует множество систем оценки морфологии ооцита. Приведенная ниже система — пример оценки на основе внешнего вида:
• 0. Атретический ооцит, дегенерация.
• 1. Есть зародышевый пузырек. Ооцит еще очень незрелый.
• 2. Corona radiata плотный/темный, но зародышевый пузырек отсутствует. Кумулюс начинает отслаиваться, но ооцит сложно разглядеть, он еще незрелый.
• 3. Corona radiata сияет и освобождается, яйценосный холмик свободен и рассеян. Ооцит можно различить, но первое полярное тельце до сих пор отсутствует. Ооцит незрелый, велика вероятность экструзии полярного тельца в ближайшее время.
• 4. Оптимальный уровень зрелости для осуществления оплодотворения. Кумулюс полностью развит, первое полярное тельце просматривается.

- Рекомендуем далее ознакомиться со статьей "Созревание ооцитов in vitro при ЭКО. Гормоны"

1. Хирургический забор спермы. Микрохирургическая эпидидимальная аспирация спермы (MECA)
2. Тестикулярный забор-аспирация спермы (ТЕСА). Микроскопический тестикулярный забор спермы (микроТЕСА)
3. Консервация сперматозоидов. Обработка ооцитов при ЭКО
4. Забор яйцеклетки при ЭКО. Оценка состояния ооцита
5. Созревание ооцитов in vitro при ЭКО. Гормоны
6. ЭКО. Традиционное оплодотворение
7. Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоидов (ИЦИС). Методика
8. Оценка оплодотворения ооцита при ЭКО. Критерии
9. Оценка состояния эмбриона при ЭКО. Критерии
10. Культивирование эмбриона при ЭКО. Вспомогательное инкубирование