Селективный скрининг в генетике. Генетические тесты селективного скрининга наследственной патологии

Качественные биохимические пробы с мочой, используемые для диагностики фенилкетонурии:
Проба Феллинга с полуторахлористым железом (FeCl3) (тест с хлористым железом). К 2-5 мл (в среднем 4 мл) свежей мочи, добавляют 1 мл магниевого реактива, фильтруют и добавляют 5-10 капель 10 % раствора FeCl Тест положителен при ФКУ и болезни кленового сиропа. При ФКУ моча окрашивается в темно-зеленый цвет (из-за фенилкетонов), а при болезни кленового сиропа - в цвет хаки (из-за а-кетокислот). Тест может быть положительным при алкаитонурии, тирозинемии, гиперглицинемии, гистидинемии.

Индикаторные бумажные тесты. Конец индикаторной бумажки, пропитанной буферным раствором FeGr опускается в мочу. Появление зеленого окрашивания позволяет предположительно определить содержание фенилпировиноградной кислоты в моче.

Полуколичественные микробиологические тесты для определения концентрации фенилаланина в крови:
Тест Гатри. Используется культура B.subtilis, рост которой подавляется добавлением в среду ингибитора - 2-тиеиилаланина. Тормозящее влияние ингибитора устраняется при повышенных концентрациях фенилаланина в крови обследуемого. Содержание ФА в крови определяется путем измерения зон роста микроба и сравнения с соответствующими стандартами. Чувствительность метода - 20 мг/л. Пробы считаются положительными при концентрациях ФА более 40 мг/л.

Метод ауксотрофных штаммов E.coli К-12. Предложен Д.М. Гольдфарбом и соавт. (1968) и модифицирован Н.А. Абросимовой и соавт. (1974). Кровь обследуемых, как и при методе Гатри, наносится в виде дисков на бумажные бланки. Проба считается положительной, если ширина зоны соответствует концентрации ФА более 40 мг/л.
Полуколичественные биохимические методы определения фенилаланина: методы бумажной хроматографии, флюорометрический метод.

генетическая патология

Количественный биохимический метод определения концентрации фенилаланина в крови методом хроматографии на ионообменных смолах (автоматический аминоанализатор).
Нагрузочные пробы с L-фенилаланином используются для уточнения причин гиперфенилаланинемии и при определении гетерозиготного носительства. Пищевая нагрузка ФА проводится натощак — через 1, 2, 3 и 4 часа после нагрузки. Для гетерозиготных носителей характерен высокий подъем и более медленное, чем у здоровых лиц, снижение уровня ФА после нагрузки.

Методы, используемые для диагностики гистидинемии

Определение концентрации гистидина в крови и моче с помощью мутан-тного штамма E.coli K-12, ауксотрофного по гистидину.
Определение спектра аминокислот (в том числе и гистидина) методом хроматографии.
Определение уроканиновой кислоты в моче и поте методом одномерной хроматографии методом спектрофотометрии.

Пероральная нагрузка гистидином проводится из расчета 100 мг хлорида L-гистидина на 1 кг массы тела. Гистидин дается детям в смеси с фруктовым соком утром натощак. Уровень гистидина в крови определяется: до нагрузки, затем через 1,2,4,6 и 24 часа после нее. При этом определяется также гистидин в суточной моче до и после нагрузки.

Определение активности гистидазы в роговом слое коже или в пунктате печени по методу Kihara и соавт. в модификации СР. Мордашева и соавт. Степень активности фермента вычисляется по образованию уроканиновой кислоты в гомогенате кожи или печени после инкубации в 0,02 М Na-пирофосфатном буфере в присутствии гистидина в качестве субстрата, а также сывороточного альбумина и восстановленного глутатиона. В контрольную пробу гистидин не добавляется. Оптическая плотность раствора измеряется на спектрометре СФ-4 при 277 нм. Содержание уроканиновой кислоты определяется по калибровочному графику. Активность гистидазы выражается в нмоль уроканиновой кислоты/ (г ткани/час). У больных с гитидитнемией активность гистидазы в коже может отсутствовать или быть сниженной, но возможен и нормальный ее уровень.

- Читать далее "Диагностика гомоцистинурии. Цианид-нитропруссидный тест"

Оглавление темы "Биохимическая диагностика в генетике":
1. Биохимические показатели наследственной патологии. Массовый скрининг в генетике
2. Селективный скрининг в генетике. Генетические тесты селективного скрининга наследственной патологии
3. Диагностика гомоцистинурии. Цианид-нитропруссидный тест
4. Исследование сыворотки в генетике. Исследование мочи в генетике
5. Диагностика гетерозиготного носительства. Показания для исследования органических кислот в моче
6. Диагностика галактоземии. Исследование метаболитов стероидогенеза
7. Нарушения аминокислотного обмена. Программы диагностики нарушений аминокислотного обмена
8. Хромосомная патология у детей. Хромосомные синдромы
9. Клиническая цитогенетика. Цитогенетические методы в генетике
10. Показания для исследования кариотипа. Показания для проведения хромосомных исследований

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: