Методы диагностики наследственных болезней соединительной ткани:
• Определение кислых ГАГ мочи по содержанию уроновых кислот карбазоловым методом Dische, Bitter Muir.
• Определение фракционного состава ГАГ методом колоночной хроматографии по Schiller и соавт. в модификации Bitter Muir.
• Орцилоновая реакция по содержанию уроновых кислот в отдельных фракциях ГАГ по Schulze с использованием реактива Биаля.
• Определение степени сульфатации ГАГ по отношению молярных концентраций S042' - групп и уровновых кислот методом Dodgson.

• Определение общего и свободного оксипролинав моче по Bergman Lexley в модификации А.Я. Дьячковой.
• Определение креатинина мочи с помощью цветной реакции Яффе.
• Определение ферментной активности:
• a-L-идуронидазы в культуре кожных фибробластов по Weisman и Santiago для диагностики МПС I и II типа;

• идуронатсульфатазы в культуре клеток кожных фибробластов с помощью радиоизотопного метода Hall и соавт. для диагностики МПС II типа;
• гепаран-N-сульфатазы в культуре клеток кожных фибробластов или лейкоцитов по Kreisse для диагностики МПС Санфилиппо А;
• N-ацетил-а-глкжозаминидазы в культуре клеток кожных фибробластов по O'Brien для диагностики МПС Санфилиппо В;
• N-ацетилгалактозамин-4-сульфатазы в культуре клеток кожных фибробластов с помощью радиоизотопного метода Matalon Dorfman для диагностики МПС VI типа.

Современная программа диагностики мукополисахаридозов предусматривает выделение несколько форм заболеваний, точная идентификация которых на основе новых биохимических и молекулярно-генетических исследований постоянно уточняется.

Клинические формы мукополисахаридозов, локализация генов, дефекты лизосомных ферментов представлены в таблице.

При биохимической диагностике МПС используется принцип двухэтапной диагностики. На первом этапе устанавливается наличие или отсутствие суммарной гиперэкскреции и накопление в тканях субстратов блокированных (из-за недостаточной активности фермента) метаболических реакций. На втором этапе выявляют нарушение уровня активности лизосомного фермента, идентифицируют продукт накопления и количественно его оценивают.

Обнаружение биохимического маркера МПС - гиперэкскреции ГАГ с мочой - является основным скринирующим тестом, позволяющим выделить эту группу заболеваний из группы фенотипически сходных состояний, к которым относятся фенокопии МПС -гипотиреоз, ганглиозидозы, муколипидозы, гликопротеидозы. Накапливающиеся в тканях и биологических жидкостях больных глюкозаминогликаны относятся, в основном, к четырем классам соединений: хондриотинсульфат АС, дерматансульфат, гепарансульфат, кератансульфат.

Варианты типов почечной экскреции глюкозаминогликанов представлены в таблице.

На первом этапе биохимического скрининга используется тест с цетилтриметинаммониумом бромида (ЦТАБ) и метод количественного определения сульфатированных ГАГ в моче с альциановым голубым, позволяющие выявить повышенную экскрецию ГАГ с мочой. Разделение ГАГ на фракции осуществляется с помощью метода электрофореза на ацетатцеллюлозных мембранах.

Точная верификация типа мукополисахаридоза требует выявления снижения активности соответствующего лизосомного фермента в плазме и/или лейкоцитах или в культуре фибробластов. Определение активности лизосомальных ферментов в лейкоцитах и плазме крови проводится с использованием производных метилумбеллиферона и нитрокатехола (Sigma, ICN) и соответствующих субстратов и оборудования.

В качестве флюориметра может использоваться отечественный флюориметр - прибор «Квант-9». В последние годы, наряду с методами биохимического анализа, успешно применяется метод ДНК-диагностики для верификации формы мукополисахаридоза.

Комплексный метод диагностики мукополисахаридозов может использоваться как для постнатальной диагностики, так и для пренатальной диагностики (одновременный анализ активности лизосомальных ферментов и проведение ДНК-диагностики в различных образцах пренатального материала — в биоптатах ворсин хориона, амниотических клетках и культуре клеток с определением ГАГ в амниотической жидкости).

Точная верификция нозологической принадлежности патологии и нозологический диагноз мукополисахаридоза имеют особенно важное значение для медико-генетического консультирования семей, отягощенных данным заболеванием.

- Рекомендуем далее ознакомиться со статьей "Методы диагностики наследственных рахитоподобных заболеваний"

1. Методы диагностики фенилкетонурии - проявления
2. Методы диагностики гиперфенилаланинемии (ГФА) - проявления
3. Скрининг на врожденный гипотиреоз - проявления
4. Скрининг на муковисцидоз - проявления
5. Скрининг на адреногенитальный синдром - проявления
6. Скрининг на галактоземию - проявления
7. Скрининг на гомоцистинурию - проявления
8. Методы диагностики наследственных болезней липидов
9. Методы диагностики наследственных болезней соединительной ткани
10. Методы диагностики наследственных рахитоподобных заболеваний