Непрямой тест с иммунными шариками предназначен для обнаружения антиспермальных антител в инактивированной нагреванием сыворотке, семенной плазме и цервикальной слизи, разведенной бромелайном.
Дважды отмыть образец сперматозоидов донора буфером I, как описано выше.
Довести отмытую суспензию сперматозоидов до концентрации 50 х 10⁶/мл буфером II.

Развести 10 мкл тестируемой жидкости в 40 мкл буфера II, добавить 50 мкл отмытой суспензии сперматозоидов и все тщательно смешать. Инкубировать смесь в течение 1 ч при 37 °С.
Дважды отмыть сперматозоиды и провести тест с иммунными шариками, как описано выше.

Для каждой партии тестов следует проводить положительный и отрицательный контроль. Положительный контроль проводят с использованием сыворотки донора с высокими титрами антиспермальных антител (в сыворотке) по результатам непрямого теста с иммунными шариками.
Эту сыворотку подвергают анализу параллельно с каждой партией исследуемых образцов.

Количественные методики:
• Иммуноферментный анализ (Zanchetta, 1982; Alexander & Bearwood, 1983).
• Радиоиммунный анализ (Haas, 1980).
• Проточная цитометрия (Haas & Cunningam, 1984).

Критерий. Положительным считается результат обнаружения АСАТ в крови более 75 МЕ/мл.
Определение специфических антиген-антительных связей:
• Иммуноблоттинг (Hayes, 1989; Snow & Ball, 1992).
• Хроматография с иммуноабсорбцией (Roitt, 1997).

Эпителий слизистой шейки матки состоит из секреторных клеток различного типа. Природа и количество секреторных клеток варьируют в различных участках шейки матки. Продукты секреции этих клеток входят в состав цервикальной слизи. Гормоны яичника регулируют секрецию цервикальной слизи. Изменение объема секреции цервикальной слизи носит циклический характер. У здоровых женщин репродуктивного возраста суточная продукция слизи колеблется от 0,5 мл в середине менструального цикла до менее 0,1 мл в другие фазы цикла. В состав цервикальной слизи входит небольшое количество эндометриальной, трубной и, возможно, фолликулярной жидкости. Кроме того, в цервикальной слизи присутствуют лейкоциты и клеточный детрит из эпителия слизистой матки и цервикального канала. Цервикальная слизь - это гетерогенный секрет, состоящий из компонентов «высокой» и «низкой» вязкости. Она характеризуется консистенцией, растяжимостью и кристаллизацией.

Компонент «высокой» вязкости состоит из муцина - волокнистой системы, построенной из пептидного ядра и олигосахаридных боковых цепей. К компоненту низкой вязкости относятся электролиты, органические соединения и растворимые белки. Циклические изменения составных частей цервикальной слизи могут влиять на проникающую способность и выживаемость сперматозоидов. Сперматозоиды способны пенетрировать цервикальную слизь приблизительно с 9-го дня нормального 28-дневного менструального цикла, и эта способность постепенно усиливается, достигая своего пика непосредственно перед овуляцией. После этого способность к пенетрации снижается, причем раньше, чем наступают видимые изменения в характере цервикальной слизи. Часто отмечается индивидуальная вариабельность во времени и степени проницаемости слизи для сперматозоидов. Подвижные сперматозоиды, направляемые волокнами цервикальной слизи, попадают в цервикальные крипты, где они могут собираться, а затем постепенно проникать в матку и маточные трубы.

Шейка матки и ее секрет восприимчивы к пенетрации сперматозоидами во время или перед овуляцией и создают барьер для пенетрации в другие фазы цикла, защищают сперматозоиды от «враждебной» среды влагалища и от фагоцитоза. В слизи шейки матки происходит селекция сперматозоидов за счет разницы в подвижности и морфологии, а также инициация капацитации сперматозоидов.

Сперматозоиды в цервикальной слизи всегда находятся в жидкой среде в виде суспензии. Взаимодействие сперматозоидов с секретами репродуктивного тракта женщины критически важно для выживания и сохранения функциональной способности сперматозоидов. В настоящее время отсутствуют методы, с помощью которых можно было бы на практике оценить влияние маточной и трубной жидкости на сперматозоиды. Цервикальная же слизь легко доступна для взятия образца и исследования. Оценка взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью очень важна, ее следует включать в обследование по поводу бесплодия. Выявление нарушения взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью может служить показанием к проведению искусственной внутриматочной инсеминации или других методов вспомогательных репродуктивных технологий.

- Читать далее "Получение цервикальной слизи. Оценка цервикальной слизи"