Окрашивание тканей для микроскопии. Техника

При проведении микроскопического исследования в большинстве случаев используют окрашенные срезы. За отдельными исключениями, большинство тканей бесцветны, отчего их исследование в неокрашенном виде с использованием световой микроскопии не дает результата.

Поэтому были разработаны методы окраски тканей, которые не только делают заметными различные тканевые компоненты, но и позволяют выявить различия между ними. Красители связываются с тканевыми компонентами более или менее избирательно.

Большинство этих красителей имеют свойства кислых или основных соединений и обладают тенденцией к формированию электростатических (солевых) связей с ионизируемыми радикалами тканей. Тканевые компоненты, которые активно окрашиваются основными красителями, известны как базофильные (греч. basis— основа + phileo — любить), а те, что обладают сродством к кислым красителям, — как ацидофильные.

Примерами основных красителей являются толуидиновый синий и метиленовый синий. Гематоксилин обладает свойствами основного красителя, то есть он окрашивает базофильные тканевые компоненты. Способность главных тканевых компонентов ионизироваться и реагировать с основными красителями обусловлена наличием в их составе кислот (нуклеиновых кислот, гликозаминогликанов и кислых гликопротеинов). Кислые красители (например, оранж G, эозин и кислый фуксин) окрашивают ацидофильные компоненты тканей, такие, как митохондрии, секреторные гранулы и коллаген.

окрашивание тканей для микроскопии

Из всех красителей наиболее часто используют гематоксилин и эозин в виде комбинации. Гематоксилин окрашивает в синий цвет ядро клетки и другие содержащие кислоты структуры, такие, как богатые РНК (рибонуклеиновой кислотой) участки цитоплазмы и межклеточное вещество (матрикс) гиалинового хряща. Напротив, эозин окрашивает цитоплазму и коллаген в розовый цвет.

В различных гистологических методиках используют и многие другие красители, в частности получили распространение трихромные методы (например, окраска по Маллори, окраска по Массону). Эти трихромные окраски, помимотого, что очень хорошо выявляют ядра и цитоплазму, помогают отдифференцировать коллаген от гладкой мышечной ткани. Хорошей методикой для выявления коллагена является использование пикросириуса, особенно в сочетании с поляризованным светом.

Во многих методах на срезах обнаруживаются маркеры в виде окрашенных преципитатов, но клетки и границы клеток часто невидимы. В этом случае применяют докрашивание, для которого обычно используют единственный краситель, наносимый на срез для выявления ядра или цитоплазмы.

Хотя большинство красителей успешно используется для визуализации различных тканевых компонентов, они обычно не дают информации о химической природе исследуемых тканей. Помимо окрашивания тканей с использованием красителей, распространенным методом, особенно при исследовании нервной системы, является импрегнация металлами, такими, как серебро и золото.

Вся процедура — от фиксации до исследования ткани с использованием светового микроскопа — занимает от 12 ч до 2,5 суток, в зависимости от размеров образца ткани, фиксатора и заливочной среды.

- Читать далее "Световая микроскопия: методика, разрешающая способность"

Оглавление темы "Методы исследования в гистологии":
  1. Что такое гистология? Задачи
  2. Подготовка тканей к исследованию. Гистологические срезы
  3. Фиксация тканей для исследования. Фиксаторы
  4. Заливка тканей для исследования. Блоки препаратов
  5. Окрашивание тканей для микроскопии. Техника
  6. Световая микроскопия: методика, разрешающая способность
  7. Фазово-контрастная микроскопия: методика, принципы
  8. Поляризационная микроскопия: методика, принципы
  9. Конфокальная микроскопия: методика, принципы
  10. Флюоресцентная микроскопия: методика, принципы

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: