Оглавление темы "Патология клетки.":
1. Молекулярная диагностика пороков развития. Гибридизация ДНК. Блот-гибридизация. Клонирование ДНК. ПЦР.
2. Биологическое моделирование. Принципы лечения наследственных болезней.
3. Профилактика наследственных болезней. Пренатальная диагностика наследственных болезней.
4. Преклиническая диагностика наследственных болезней. Контроль мутагенной опасности.
5. Патология клетки. Гомеостаз. Адаптация.
6. Гибель клетки. Некроз. Апоптоз. Повреждение клетки.
7. Причины повреждения клетки. Повреждающие факторы клетки.
8. Биологические факторы повреждения клетки. Природа повреждающих факторов клетки.
9. Эффекты повреждающих факторов. Общие механизмы повреждения клетки.
10. Нарушение энергетического обеспечения клетки. Расстройства транспорта энергии в клетке.

Молекулярная диагностика пороков развития. Гибридизация ДНК. Блот-гибридизация. Клонирование ДНК. ПЦР.

При помощи методов ДНК-диагностики устанавливают последовательность расположения отдельных нуклеотидов, выделяют гены и их фрагменты, устанавливают их наличие в изучаемых клетках. К числу наиболее эффективных методов относятся гибридизация ДНК (блоттинг, in situ и т.д.), клонирование ДНК, полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Гибридизация ДНК

Для определения порядка расположения нуклеотидов в исследуемом генетическом материале изучаемую ДНК помещают в специальную среду, где происходит контакт ДНК с нитями другой нуклеиновой кислоты. В случае комплементарно-сти каких-либо двух нитей происходит их «сшивка». При специальных исследованиях используют генетические «зонды» — фрагменты меченной радиоактивным изотопом однонитевой ДНК с известной последовательностью нуклеотидов.

Молекулярная диагностика пороков развития. Гибридизация ДНК. Блот-гибридизация

Блот-гибридизация

Для выявления интересующих (в том числе мутантных) генов ДНК подвергают рестрикции. Полученные фрагменты ДНК подразделяют по молекулярной массе, денатурируют и переносят на носитель (нейлоновую или иную мембрану). Фиксированную на носителе в виде пятна ДНК гибридизируют с меченным радиоактивным изотопом ДНК- или РНК-зондом. В результате определяют положение аномального фрагмента ДНК.

Клонирование ДНК

С помощью специализированных ферментов (ДНК-рестриктаз) подразделяют нить ДНК на отдельные группы генов или на единичные гены. Для изучения признаков (в том числе патологических), кодируемых данными генами, особенностей транскрипции и трансляции создают нужное количество копий данного гена.

Полимеразная цепная реакция

ПЦР (специфическая амплификация ДНК) применяют для изучения регионов предполагаемых мутаций и других особенностей структуры ДНК. Для исследования можно использовать любой биологический материал, содержащий ДНК (например, кусочек ткани, каплю или пятно крови, смыв полости рта, луковицу корня волос). На первом этапе исследуемую ДНК подвергают отжигу: расщепляют на две нити при нагревании до 95—98 °С. Затем одну из нитей гибридизи-руют и стимулируют синтез последовательности, комплементарной исследуемой ДНК (с помощью термофильной ДНК-полимеразы). В первом цикле ПЦР гибридизацию выполняют с исследуемым фрагментом ДНК, а в последующих — с вновь синтезированными. При каждом цикле реакции число синтезированных копий участка ДНК увеличивается двукратно. Циклы повторяют до накопления нужного количества ДНК. Эту методику разработал и предложил Кэри Муллис.

- Читать далее "Биологическое моделирование. Принципы лечения наследственных болезней."

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: