Мы изучали влияние НЧУЗ на адгезивную способность бактерий на модели кишечной палочки. При этом ставили прямую реакцию гемагглютинации, т. е. выявляли признаки функциональной активности «пилей», и проводили изучение ультраструктуры последних. Оба этих показателя рассматривали у неозвученных бактерий и после действия НЧУЗ.

При этом для озвучивания в колбу с взвесью суточной культуры кишечной палочки вводили волноводизлучатель, после чего микробы озвучивали в течение 15 мин. Полученную затем микробную взвесь трижды отмывали фосфатным буфером и доводили до концентрации 106—107 микробных тел/мл.

Электронно-микроскопическое исследование морфологии микробных клеток проводили по двум направлениям: изучали ультраструктурные изменения в микробных клетках под влиянием только НЧУЗ и комбинированного воздействия НЧУЗ с канамицином. В качестве контроля служили интактные бактерии (не подвергнутые воздействию НЧУЗ), а также бактерии, обработанные только антибиотиком.

Шестичасовую культуру кишечных палочек (штамм № 815), выращенную в мясо-пептонном бульоне, озвучивали в течение 15 мин в колбе объемом 1 л. В другую колбу перед озвучиванием добавляли канамицин из расчета 0,5 г на 1 л жидкости. Ультратонкие срезы кон-, трастировали и изучали под электронным микроскопом JEM-7A (Япония). Кроме того, проводили электронно-микроскопическое изучение «пилей» кишечных палочек. Для этого суспензию кишечной палочки до и после озвучивания разводили до концентрации 5*107 микробных тел/мл и помещали каплю на несмачиваемую поверхность пластиковой чашки Петри. На каплю наносили медную сетку, покрытую формоваром и инкубировали 5 мин. Избыток влаги удаляли, и сетки сушили на воздухе. Далее проводили круговое оттенение палладием.

В настоящее время «пили» рассматриваются как один из факторов вирулентности бактерий. Адгезивная способность, обусловленная наличием «пилей», является характерной чертой штаммов, выделенных от больных, в частности для отобранного штамма кишечной палочки № 815. У этого штамма наличие «пилей» было выявлено в реакции гемагглютинации с эритроцитами морской свинки и лошади. Титр реакции составлял 1:16 с эритроцитами морской свинки и 1:128 с эритроцитами лошади.

Реакция тормозилась в среде с D-маннозой, что свидетельствовало о наличии у бактерий «пилей» I типа, позволяющих бактериям прикрепляться ко многим клеткам макроорганизма. При электронно-микроскопическом изучении было подтверждено наличие большого количества «пилей» у изученной кишечной палочки. После УЗО реакция гемагглютинации исчезала.

Электронно-микроскопическое изучение озвученных микробных клеток также показало существенные изменения: часть бактерий разрушалась с выходом некоторого количества содержимого клеток наружу; у бактерий, оставшихся неразрушенными, наблюдалась выраженная дезинтеграция «пилей» и жгутиков. У других можно было обнаружить обломки «пилей» или жгутиков, многие из бактерий выглядели совершенно лишившимися всех филаментов.

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют о выраженном действии НЧУЗ на кишечную палочку, в первую очередь на ультраструктуры, ответственные за адгезивность микробов.

Влияние УЗ на свойства золотистого стафилококка было изучено на примере золотистого стафилококка № 79, обладающего плазмокоагулазой, лецитовителлазой и ферментом, расщепляющим маннит в анаэробных условиях. В основе анализа лежало влияние НЧУЗ на указанные ферменты, являющиеся показателем вирулентности стафилококка. Для исследования использовали суточную культуру стафилококка, разведенную изотоническим солевым раствором до концентрации 106 микробных тел в 1 мл.

Она озвучивалась в течение 15 мин в колбе объемом 1 л. Контролем служила та же культура стафилококка, не обработанная УЗ. Сравнительное изучение 10 колоний исходного и «озвученного» штаммов золотистого стафилококка показало существенные различия по трем выше перечисленным признакам. Из 10 колоний только в 3 микробы сохранили способность ферментировать маннит, не продуцировали лецитовителлазу и не коагулировали плазму. Полученные данные позволяют сделать вывод о снижении вирулентности золотистого стафилококка в результате ультразвуковой обработки.

- Читать далее "Снижение вирулентности под действием ультразвука. Хемотаксис после ультразвука"