Главным условием правильного выделения анаэробов является создание условий анаэробиоза на всех этапах исследования — при сборе, транспортировке и культивировании микробов. Успешное выделение анаэробов во многом зависит от правильного забора и доставки материала в лабораторию [Jousimier-Somer Н., Finegold S., 1984]. Анаэробы входят в состав нормальной микрофлоры, поэтому техника забора материала должна исключить возможность их загрязнения микроорганизмами кожи, слизистых оболочек.

Результаты изучения слюны, мокроты, вагинального секрета, фекалий не будут отличаться достоверностью [Sutter V. et al., 1980]. Существуют определенные методы забора патологического материала в целях исключения контаминации нормальной микрофлорой. Если есть возможность получить материал с помощью пункции, его следует доставить в шприце, вытеснив воздух и закрыв отверстие специальной пробкой. Доставка материала на обычном тампоне малоэффективна. Материал лучше доставлять в специальной среде, либо забирать его тампоном, импрегнированным 10% раствором гемоглобина. Вместо гемоглобина можно использовать лизированную донорскую кровь (10% лизированной крови, 10% глицерина, 80% изотонического солевого раствора).

Если материал невозможно сразу транспортировать, то хранить его нужно при 15 °С, чтобы поддержать жизнеспособность и предупредить от прорастания аэробной флорой [Jousimer-Somer Н., Finegold S., 1984]. Из материала готовят мазки для окраски по Граму. Посев материала производят на плотные и жидкие питательные среды, в которые внесены соответствующие добавки, указанные при изложении о бактероидах.

Плотные среды содержат лизированную кровь. Посевы инкубируют не менее 2 сут в анаэробных условиях при 37 °С, однако иногда их приходится инкубировать до 10—12 дней из-за медленного роста бактероидов.

Посевы просматривают с помощью лупы с увеличением в 6—8 раз или стереоскопического микроскопа. Затем описывают морфологию каждого вида колоний, пересевают их на две чашки, одна из которых помещается в аэробные, другая — в анаэробные условия. Первичные посевы просматриваются на способность к люминесценции: многие виды анаэробов в ультрафиолетовых лучах начинают светиться.

Далее идентификацию выделенных чистых культур проводят также, как и на аэробы: изучают культуральные, тинкториальные (окраска по Граму) и морфологические свойства. Исследуют ферментативную активность: засевают культуры на пестрый ряд, который отличается специальным составом сред и тем, что посевы помещаются в анаэробные условия, например в анаэростат.

К сожалению, унифицированных питательных сред для выделения и идентификации анаэробов наша промышленность почти не выпускает, что затрудняет проведение и без того сложных исследований в клинических микробиологических лабораториях. Для идентификации грамотрицательных анаэробов (бактероидов, фузобактерий) до уровня рода применяют специальные, так называемые анаэробные диски, пропитанные антибиотиками или красителями — бриллиантовая зелень, метиленовый синий и др. [Култаев М. с соавт., 1985; Sutter V. et al., 1980]. Метод достаточно прост, доступен, а в комплексе с биохимическим рядом помогает при видовой идентификации.

Вследствие недостаточной изученности антигенных свойств анаэробных бактерий стандартных наборов диагностических сывороток для их идентификации в широкой практике не существует. Перспективным представляется получение моноклональных антител против отдельных видов анаэробов [Schulz Th. et al., 1984].

- Читать далее "Идентификация анаэробов. Лечение гнойных перитонитов"